微波改良Masson三色法在观察博来霉素诱导的大鼠肺纤维化中应用.pdfVIP

· 1014 · 临床与实验病理学杂志 JClinExpPathol2011Sep；27(9) 微波改 良Masson三色法在观察博来霉素诱导的 大鼠肺纤维化 中应用 林云恩 ，龙惠东 ，许惠娟 ，何新明 ，杨 通 关键词：微波改 良Masson三色法；VG染色法；肺间质纤维 由广东省实验动物中心提供 ，动物合格证号：SCXK(粤) 化；博来霉素 2008-0002。 中图分类号：R446 文献标识码 ：B 1．2 大鼠肺纤维化模型的复制及分组 采用戊 巴比妥钠 文章编号：1001—7399(2011)09—1014—03 (40mg／kg)腹腔注射麻醉大鼠后固定于手术台上，取颈前正 中切 口，切开皮肤，逐层分离暴露气管后缓慢注入 BLM溶液 特发性肺纤维化 (idiopathicpulmonaryfibrosis，IPF)是 (5mg／kg)，迅速直立并旋转 ，使药液均匀分布于两肺 ，缝合 一 种原因不明的弥漫性肺疾病。主要表现为弥漫性肺泡炎、 创 口。将大鼠随机分为2大组：正常组及模型组(7天组：造 肺泡单位结构紊乱和肺纤维化，最终导致肺脏结构和功能严 模后7天；14天组 ：造模后 14天；28天组 ：造模后28天)。2 重破坏，其发病机制尚未明确。研究发现，经气管内灌注博 大组大鼠气管内注入等体积的生理盐水 ，次 日各组分别给 莱霉素 (bleomycin，BLM)可以造成大鼠肺纤维化，此病理过 药 ，均按预定时间处死。 程与人类TPF的病理过程极其相似 ，因此，对BLM致大鼠肺 1．3 标本采集与处理 采用戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后 ， 纤维化不同阶段的肺组织病理改变进行研究，探讨肺纤维化 股动脉放血处死动物。沿气管打开胸腔，暴露肺组织，用止 在IPF不同阶段的病变程度 ，为临床制定有效的治疗策略提 血钳夹左主支气管，气管插管，无菌生理盐水灌洗右肺，每次 供理论和实验依据。本文用显示大鼠肺纤维化的效果来 比 2ml，共 3次。切除左肺。左下肺叶用 10％中性福尔马林固 较微波改 良Masson三色法和VG染色法。 定后脱水、透明、浸蜡、包埋 ，6 m厚切片，每个肺组织连续 切片2张，分别进行微波改良Masson三色法和VG染色法。 1 材料与方法 1．4 染色方法 1．4．1 微波改良Masson三色染色法 ① 切片常规脱蜡至 1．1 实验动物 健康雄性 sD大鼠40只，体重 180—220g 水，置于Bouin固定液中，微波低档 4min，水洗(直至切片无 色，约3min)，② Mayer苏木精染核，微波低档5min，流水冲 收稿 日期：2011—07一O1 洗 3min，③ 加丽春红2R一酸性品红复合液 (用前 1：1新鲜 作者单位：广州医学院第一附属医院病理科，广州 510120 广州医学院附属肿瘤医院ICU，广州 510095 配制)，微波低档4min，快速水洗，④ 磷钼酸磷钨酸液微波 汕头大学医学院附属第二人民医院呼吸内科，汕头 低档2min，倒掉液体，不经水洗，直接加苯胺蓝液微波低档 515O41 3min，快速水洗，用 1％冰醋酸处理3S，⑤直接用无水 乙醇 作者简介：林云恩，男，技师。Tel：(020E．mail：linyunen@ 脱水，苯酚T0液及T0液透明，中性树胶封固 J。 126．com 1．4．2 VG染色法