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维普资讯 临床与实验病理学杂志 JClinExpPathol 2004Aug；20(4) ·485 · 显示石蜡组织切片脂质的染色方法 孟峰芳 龚志锦 朱 明华 张顺 民。 【关键词】 石蜡切片；脂质 ；染色法 ；油红乙醇染色液 【中图分类号】 R446．8 【文献标识码】 B 【文章编号】 1001—7399(2004)04—0485—01 在实验动物脂质代谢模型中，为了观察组织 中脂质的分 布情况，笔者采用石蜡包埋连续切片，进行脂质染色 ，克服 了 冷冻切片不能有效原位 固定脂质 的局限性 。经过改进油红 乙醇液和 Tracy染色法的石蜡制片，获得较好 的染色效果。 1 材料与方法 1．1 材料 选用实验 鼠动脉血管脂质代谢模 型组 织，中性 福尔马林 固定 固定 24h。 1。2 试剂配制 (1)亚油酸卵磷脂混合液 ：亚油酸 5ml，卵 磷脂 2g，70 乙醇 500ml，摇匀 。(2)铬酸水溶液 ：铬酸 2g， 蒸馏水 98m1。(3)碳酸氢钠水溶液 ：碳酸氢钠 5g，蒸馏水 100ml。上述 3种溶液放置 2周后方可使用 。(4)油红乙醇 改进染色液 ：油红 2．5g，7O 乙醇 500ml。充分溶解后 ，形 图 l 动物 鼠动 脉血 管 内膜 脂质物质 呈红色 ．细胞 核呈蓝 色 成饱和液，置于室温下可长期保存 。 图 2 血管壁周 围组织 的网状结构脂质呈红色 ，细胞核呈蓝色 1．3 实验动物组织处理步骤 (1)将上述 中性福 尔马林 固 定的组织取材后 ，用蒸馏水浸洗 2次。(2)放在亚油酸卵磷 首先选用 中性福尔马林固定液 ，使组织细胞转变成不溶性的 脂混合液 中3天 (置隔水式恒温箱 56℃)。(3)70 乙醇反 物质 ，为了使脂质的饱 和脂肪酸能够保 留完整，而选 用亚油 复洗涤 8h，自来水浸洗 58h。(4)蒸馏水浸洗 2次，铬酸水 酸和卵磷脂 乙醇混合液，得 到较好 的效果 ，经过 铬酸和碳 酸 溶液 中 4℃ 24h。(5)自来水洗 24h，碳酸氢钠水溶液 24h。 氢钠 的作用，可增强组织 的电子密度 即呈深色显示 ，并有助 (6)自来水水洗 8h后 ，进行常规组织脱水、透 明和石蜡浸透 于细胞核对 比着色程度 。 的质量控制 “。 石蜡组织切片的脂质染色 ，克服 了冷冻切片的整体结构 1．4 染色方法 (1)石蜡切片厚 5 m，常规脱蜡 至水 。(2) 差 、不能有效地原位 固定和易丢失脂质 的局限性 ，经过改进 7O 乙醇浸洗后 ，人油红乙醇改进染色液中 40min。(3)蒸 的Tracy方法。，能得到较好 的效果 ，且便于蜡块长期保存 馏水浸洗 ，人 Harris苏木精染色液 30S。(4)自来水浸洗至 及 回顾性研究。在染色中为 了克服脂质染色剂的 Lillie和 蓝化 ，蒸馏水浸洗 30S。(5)甘油明胶封固(勿使切片干燥)。 Ashburn的油红异丙醇配制方法复杂 、染色液不易保存 、染 色效果差 的缺 点 ，我们选用 改进 后 的油红 乙醇饱 和染色 2 结果 液 ，其配制简单，染色可靠 ，存 放时间较长。用 时倒取清 液 ，置立式染色缸 中进行染色，不能滴染 ，以防止染液沉淀 ， 鼠动脉血管 内膜脂质呈红色 ，细胞核呈蓝 色 (图 1)；血 而影响切片质量 。复染 Harris苏木精 时间要快 ，不宜进行 管壁周围组织 的网状结构脂质呈红色，细胞核呈蓝 色 (图 酸性 乙醇分化 ，可减少程序 。此法可为开展实验性脂质研究 2)。