活体冷冻固定技术.pdfVIP

维普资讯 ～ I 四川解剖学杂志 1998年第 6卷第3期 韦技术方法 鬃 邗 弗 带 水 活体冷冻固定技术 ；厂＼ 项 涛 、 - ． ． ．- - — - - - _ ·- ～ 华西医科大学人体解剖学教研室 成都 610041 摘要 常规的组织浸润和灌流固定是在中止 上 口直径约 60ram，下 口约 5mm。将其固定 血液循环的状态下 ，固定保存组织的 。缺血会造成组 于刀柄背侧 ，下 口约平刀片中分 。使用前将刀 织超微结构的一定变化。新近发展了一种活体冷冻 片置于液氮 中预冷至液氮温度 (一196~C)。刀 固定方法 ，可能在保持正常血液循环的条件下 ，冷冻 柄应缠绕一定厚度 的纱布，以免施术者冻伤 。 固定组织。它是金属接触骤冷和致冷剂骤冷的结合。 致冷 剂为异 戊烷 ／丙烷 混合 液 。取 异戊 烷 本文作者应用这一技术作了肾小球超微结构的扫描 15ml于 50ml的烧杯 内，将烧杯置于液氮 中 电镜研究。该技术制备的标本上可见肾小球超微结 冷却 ，磁力搅拌；将市售的丙烷气体冲入异戊 构完整 ，足突平滑圆润，红细胞呈多形性 。 烷 中，冷却液化 ，并与之形成混合液，直至容 关键词 冷冻固定 肾小球 扫描电镜 —— ——。 ‘-—- 。 。 一 量 达 45ml即可 。此 混 合 液 的温 度 为 一 由于在化学固定和脱水过程 中要产生一 193C| ，应立 即使用以免结霜 。 些人工假像，常规的电镜组织固定方法会改 1．2 活体冷冻固定 变组织细胞的超微结构。 。冷冻 固定虽然 BAIB／c小 鼠 4只，体重 20～30克 ，苯 能避免常规固定中的人工假像，但传统 的．冷 巴比妥钠 (50mg／kg体重)腹膜腔注射麻醉 。 左腹直肌旁切 口暴露腹腔 ，游离左 肾。用尖镊 冻固定都是将组织从动物体 内取出后进行， 仔细剥离 肾纤维囊，将一塑料薄板放在分离 取材时即中断了组织的血液循环，可导致 肾 好的肾脏下面 。在 以上过程 中应避免扰动肾 小球的超微结构变化 ．形态学的观察要能 血管及输尿管 ，保持肾脏的正常位置。在保持 反映生理状态下 的超微结构 ，并且不应在标 正常血液循环的状态下，用预冷的 “冷刀”从 本制备 中导入人工假像才真正有意义 。近年 ， 肾脏的上、中 1／3交界处迅速切入 ，同时将异 Ohno等 发 展 了一 种 新 的 冷 冻 固定 技 戊烷 ／丙烷混合液倒入铝箔漏斗 中，使致冷剂 术 ]_一～活 体 冷 冻 固定技 术 invivocry— 沿刀刃立即覆盖 J：肾脏切面组织的表面 。随 otechnique，可以在不 中断组织血液循环的