外环境在体外培养干细胞分化技术中的应用.pdfVIP

维普资讯 · 36 · SICItUANJOURNALOFANATOMYVOL．14 NO．3 2006 · 综述 · 外环境在体外培养干细胞分化技术中的应用 严苏纯，祝彼得 ，陈永锋 ，陈志伟 (成都中医药大学解剖学与组织胚胎学教研室，成都 610071) 【中图分类号1 Q27 【文献标识码】 A 干细胞是未分化的前体细胞，既能自我更新，又能朝各种 可以稳定培养环境，并提供严格 的质量控制，并且添加的动物 细胞系分化。依据它们的来源不同，大致可以分为两类，一种 或人的蛋白质可以附着在培养细胞的表面，可能增加移植的 来源于胚胎干细胞，包括来 自于胚泡期内细胞群的胚胎干细 抗原性。因此，理想的体外干细胞培养环境应该用化学的方 胞 (ES)以及来 自于胎期的生殖嵴的干细胞 (EG)，还有一种有 式确定，无论是无血清培养还是用特殊的重组生物素和生长 争议的干细胞是来 自于睾丸肿瘤细胞的胚胎性癌细胞 (EC)， 因子合成的血清替代品。在无血清环境下培养干细胞的主要 它也可被认为是胚胎源性的干细胞；另一种来源于出生后组 问题是细胞分裂指数低，凋亡率高，呈现低粘附力。在很多成 织的成人干细胞是一种被认为与组织器官再生和修复密切相 人干细胞和胚胎干细胞的培养过程中都需要血清。也有例 关的细胞。只有 ES细胞被认为是多能干细胞，因为它可以分 外，许多重要的神经干细胞的常规培养是在无血清的环境下 化出任何细胞系，这些细胞系原本是由内、中、外三胚层分化 进行的，体外培养干细胞的环境要完全去除血清其主要原因 出来的。由于成人干细胞 比ES细胞的可塑性低，以前认为， 是血清的成分很难确定，有时即使是同一生产厂家其成分含 成人干细胞也能分化出胚胎源性的组织和器官，但据 目前科 量也可能有变化，这样就阻碍实验的质量控制。另外，血清不 研文献报道，成人干细胞比我们先前想象的要具有更大的可 仅是生理物质，更重要的它还是凝血反应的病理物质，其中含 塑性。例如，从周围血或骨髓 中获得的造血干细胞可以分化 有无特征的生长和分化因子，这些因素会干扰体外干细胞的 成具有各种细胞系特征的细胞，心肌细胞、骨骼肌细胞、血管 培养向特殊细胞系发展。无血清培养条件的形成就是形成一 内皮细胞、神经外胚层、皮肤的表皮及内胚层细胞系的肝细 种合成的化学成分确定的血清替代品。例如 KSR(knockout 胞 、胃肠上皮细胞等。 ， serumreplacement)就是在体外培养未分化的干细胞时的特殊 迄今为止，无论是胚胎干细胞还是成人干细胞其分化研 发现[2]。KSR的化学提取成分不是可以任意使用的，它受专 究基础都是建立在动物模型体内的，体内实验获得的数据无 利法的保护。据报导KSR没有任何不确定的生长因子或分 论在范围上还是在用途上都很有限，因为这些在动物活体内 化促进因子。这对于体外培养明确的干细胞系的质量控制是 进行的实验很难阐明其分子机制及调控信号传导途径。所以 非常有用的。在成人干细胞方面，无血清培养或人工合成血 很有必要建立有效的实验体系去指导未分化的干细胞在体外 清的替代品已经在造血干细胞、间充质细胞和神经干细胞 的 分化为有明确定义的细胞系，从而提供一个适应基因调控和 培养中应用。但无血清培养面临最大的挑战是细胞在扩增时 分子研究的理想模型。建立这一体系的另一原因是未分化的 的分裂指数很低[3]，或许这一困难的克服要靠各种重组的生 干细胞移植到体内就有可能分化为各种细胞系的细胞，只有 物素和生长因子添加到培养环境中去刺激无血清环境下的成 很少一部分能分化为我们预期的组织，这就有可能降低临床 人干细胞扩增。重组生物素的利用是干细胞培养确定化的另 移植的疗效。的确，以前