酸性和碱性预孵育处理对骨骼肌肌纤维分型的影响—肌球蛋白ATP酶法.pdfVIP

维普资讯 f16～z 四川解剖学杂志 l998年第6卷第4期 酸性和碱性预孵育处理对骨骼肌肌纤维 分型的影 响——肌球蛋 白ATP酶法 笪 堑垩堡 1二＼；2上 川北医学院解剖学教研室，组织学与胚胎学教研室 四川南充637007 摘要 为比较分别经酸性和碱性预孵育液处 举 的数据 并没有说 明是经过 酸性 或碱性 预孵 理 的肌球 蛋 白ATP酶反应法对骨骼肌肌 纤维分 型 育后 的结果 。然而一些作者发现，即使 pH 的影 响 ，采用酸性 (pH4．5)和碱性 (plilo．4)预孵 育 值相差 0．1也会 引起分型结果变化 “，但差 肌球蛋 白ATP酶法对大 鼠躯干 的腹外侧荐尾肌 、后 异 的程度 ，尤其是酸性和碱 性预孵育 的ATP 肢 的趾长伸肌相邻切片分别染色 ，然后 比较相邻 切 酶 法对 骨骼 肌纤 维分 型结果 的一 致程 度 ，未 片 的相 同肌纤维类 型 。结果显示两种预孵 育液对 Ⅱ 见报道 。 A 型肌 纤维 的分型没有影 响 ，而 酸性预孵 育液处理 后所 鉴 别 的 I型和 ⅡB型肌 纤 维 ，在 经碱性 预 孵 育 1．材料和方 法 液后 有 少数 分别 呈 现 为 ⅡB型和 IIA 型肌 纤维 。本 研究表 明酸和碱性预孵 育 ATP酶染色对骨骼肌肌 纤 维 的分 型没有 完 全 对 应 的 “镜 相 ”结 果 ，这 可能提 1．1 实验动物和取材 实验采用 Wistar成 示肌球 蛋 白ATP酶 的活性在不 同的酸性和碱性环 年健 康雄 性大 鼠 3只 ，体 重 23O～250g戊 巴 境 中有不 同的稳定性 。 ‘ 比妥麻醉后切取躯干右侧 的腹外荐尾肌和右 关键 词 肌球蛋 白ATP酶 骨骼肌 肌纤f 侧后肢 的趾长伸肌 ，然后在每块肌 中部切取 维 大鼠 锨勃 裔 约 5mm 长 的一个组 织块 。 1．2 组 织块 冷却 和切 片 将切取 的肌组 织 肌球 蛋 白三磷酸腺苷酶 (m—ATPase) 块 立 即埋 入 滑石 粉 内(37C烘 箱烘 干 )，然后 反应可 以将骨 骼肌 肌纤 维 分为 I型 、ⅡA 型 迅速投入经液 氮预冷 的盛异戊 烷 的小塑料试 和 ⅡB型 ，其活性反 映 了骨髓肌 的生理功 管 内，再放入液氮 内保存 。取 出肌组织块 ，放 能 。慢肌 以 I型纤维为主 ．快肌 以 Ⅱ型纤维为 入恒 冷箱切 片机 内，待组 织块温度 回升至 主 。酸性和碱性孵育 ATP酶法对肌纤维分 一 18C时连续 切 片 ，厚度 15m，相邻 切 片分 型具有一定 的对应 “镜相”关系 ：I型肌纤维 别贴于两张载玻片上作 A、B片 ，室温 下干 在酸性预孵 育 的 ATP酶反应 时呈 深黑色 ， 燥 。 而碱性预孵 育后无色 ；ⅡA 型在酸性预孵 育 1．3 ATP酶 染 色 根 据 Guth和 Samaha 时无色 ．而碱性预孵育时呈深 黑色 ；ⅡB型在 介 绍 的方法 ，A 片经酸性 (pH4．5)预孵 育 两种预孵 育后色泽度均为 中等 ，呈灰色 。因 液 (醋酸缓冲液 )处理 10分钟 ，相邻 的 B片 此 ，一些作者在描述骨骼肌肌纤维类 型时 ，列 先用 5 的 甲醛 (4C)固定 5分钟 ，然后经