剪接因子SRp55原核表达质粒的构建与表达.pdfVIP

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2017-08-08 发布于安徽
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剪接因子SRp55原核表达质粒的构建与表达.pdf

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南通大学学报（医学版） · · （）（） 79 JournalofNantongUniversity MedicalSciences 2007 ∶272 文［章编号］（） 1000-2057200702-0079-04 剪接因子SRp55原核表达质粒的构建和表达* ** *** 尹晓敏，施建华，刘飞南（通大学江苏省神经再生重点实验室，南通226001) 摘要目的：本研究通过扩增剪接因子蛋白家族的基因，构建融合蛋白原核表达质粒 [ ] SR SRp55 GST pGEX- 2T/SRp55，并在大肠杆菌中诱导表达并进行纯化。方法：用PCR法扩增SRp55基因，将扩增产物和载体pGEX-2T进行双酶切后回收，连接载体和目的片段，获得重组质粒。将重组质粒转化大肠杆菌（）。在大肠杆菌（）中 BL21DE3 BL21DE3 通过进行诱导表达，然后用谷胱甘肽琼脂糖球珠，亲和纯化得到纯的融合蛋白。结果：基因以 IPTG - GST-SRp55 SRp55 正确的阅读框架插入。诱导大肠杆菌（）表达，随诱导时间的增加蛋白表达量增高，以后接近 pGEX-2T IPTG BL21DE3 4h 最高表达量。通过亲和纯化得到分子量在60kD左右的蛋白，经蛋白印迹分析证实为GST-SRp55融合蛋白。结论：成功地构建了融合蛋白原核表达质粒，并获得融合蛋白，为进一步研究蛋白可变剪接 GST pGEX-2T/SRp55 GST-SRp55 tau 机制提供了必要的基础。关键词；；原核表达；剪接因子 [ ]SRp55Tau 中图分类号文献标识码 [ ]Q786 [ ]A ExpressionofsplicingfactorSRp55inE.colicells （） YINXiaomin,SHIJianhua,LIUFei JiangsuKeyLaboratoryofNeuroregeneration,NantongUniversity,Nantong226001 [Abstract]Objective:ToexpressandpurifyGlu