亚甲基蓝褪色光度法测定肝素.pdfVIP

第 23卷，第2期 光 谱 实 验 室 Vo1．23，No．2 2006年 3月 Chinese．1ournalofSpectroscopyLaboratory M arch ，2 0 0 6 亚甲基蓝褪色光度法测定肝素① 杜美菊② 凌翠霞 马淮凌 (商丘师范学院化学系 河南省商丘市 476000) 摘 要 用紫外一可见光谱法研究肝素(Hep)对亚甲基蓝 (MB)的褪色反应，在 pH3．0的Britton Robinson缓冲溶液中，肝素与 甲基蓝形成离子缔合物时．染料发生明显的褪色．体系吸光度的降低与肝 素钠浓度成正比。建立了一种简单、灵敏、选择性高的肝素测定方法。本法在 。一4．0#g／m1范围内呈现良 好的线性关系(r-0．9978)，回收率范围为 98．8％ 101．9 。用于肝素钠注射液的分析．结果令人满意。 关键词 肝素，分光光度法，亚甲基蓝。 中图分类号：0657．32 文献标识码：B 文章编号：1004—8138(2006)02—0224—04 1 前言 肝素 (Heparin，简称为Hep)为葡糖胺聚糖．是一种广泛存在哺乳动物肝、脾、肾、胸腺、肠黏膜、 肌肉和血液等中的天然抗凝物质，具有广泛的生物学功能 ，如抗凝血、调血脂、抗血栓、免疫调节、抗 炎、抗过敏等，是预防血栓形成和治疗急性静脉血栓的重要药物[1]。对于不同的疾病应有不同的最 适剂量，临床上需要控制，目前肝素的测定方法有生物方法[2]、分光光度法[3“]、高效液相色谱 (HPIc)法[、毛细管电泳法[、质谱法 。分光光度法由于操作简便、快速、仪器价廉、灵敏度较高 等优点而得到广泛的应用。因此进一步研究灵敏度高、选择性好的新分光光度法具有重要的意义。 本文研究了亚甲基蓝(MB)与肝素的相互作用，根据其离子缔合物溶液在特定波长处吸光度值与肝 素的含量成比例的特点，建立了一种快速、简便、灵敏的测定肝素含量的分光光度法。 2 实验部分 2．1 仪器与试剂 日立UV一3010型紫外可见分光光度计 (日本 日立公司)；UV760CRT双光束紫外可见分光光 度计 (上海精密科学仪器有限公司)；pHS一3C型数显酸度计 (杭州东星仪器设备厂)。Hep(美国 sigma公司，150IU／mg)贮备液：0．1000g／I，于冰箱中4C保存；亚甲基蓝(生物染邑剂，上海三厂) 贮备液：1．OOg／I，于冰箱中4C保存 ；Britton—Robinson缓冲溶液：用磷酸、冰乙酸和硼砂配制，在酸 度计上用Na()H溶液调至所需pH值。肝素钠注射液分别由常州干红制药厂及上海制药__厂生产。 实验用水均为二次去离子水，所用其他试剂均为分析纯。 2．2 实验方法 取一组25ml容量瓶，加入一定量的亚甲基蓝溶液，然后依次加入不同体积的Hep溶液，再加 ① 河南省自然科学基金项 目．项 目编号；051102o300 ② 联系人．电话：(0370)2592844(办)；E．mail：dumeiju@eyou．c0m 怍者简介：杜美菊(1956 )，女．河南省睢县人．剐教授．研究方向：光谱分析和药物包封 收稿 口期：2005—11一O1；接受 日期：2005一¨O8 第 2期 杜美菊等；亚甲基蓝褪色光度法测定肝素 人一定量的BR缓冲溶液，以二次去离子水稀释至刻度，混合均匀。扫描 400--800nm之间的吸收 曲线或测定特定波长下的吸光度值 全部实验均在室温条件下完成。 3 结果与讨论 3．1 吸收光谱 按实验方法配制溶液后，于UV一760CRT紫外可见分光光度计上扫描 400--800nm的吸收光 谱。图1为亚 甲基蓝在水溶液中的吸收光谱，当亚甲基蓝浓度较低时，仅在656nm处有一个明显的 吸收峰，随着浓度的增加，在 611nm处出现一个明显的吸收峰。为染料聚集体的吸收。 截 波长Mnm 图 1 亚 甲基蓝溶液的吸收光谱 图 2 亚甲基蓝和肝素混合溶液的吸收光谱 pH=3．0。 肝素浓度 (~g／mL)I卜一 00；2— 2．0×10一；