凝胶成像分析系统在本科教学中的应用探索.pdfVIP

实验教学改革与实验教学示范中心建设 的断裂。断裂产物包括以5’一或3’一单磷酸酯为末端的DNA片断、游离的碱基及5一亚甲基呋 喃酮糖【2】。 DNA分子在琼脂糖凝胶泳动过程中产生电荷效应和分子筛效应。在pH高于其等电点的溶液中， DNA分子带负电荷，在电场中向正极移动。相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它 们能以同样的速度向正极方向移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应， 螺旋环状(I型)、带切口环状(II型)及线状(III型)，它们在凝胶中的电泳迁移速率不同，因而 可经电泳分离为3条带。I型DNA的迁移速率最快，其次为Ⅲ型DNA，最慢的为Ⅱ型DNA[3】。 据此，琼脂糖凝胶电泳实验可以证明(OP)2Cu+对DNA的切割作用。 3实验内容 本实验内容包括5部分：Cu(OP：12C12的合成；通过红外光谱、紫外光谱、元素分析、热重等方 助于凝胶成像分析系统评价Cu(OP)2C12的化学核酸酶活性。 4仪器与试剂 170SX (1)仪器：EC3凝胶成像仪、NicoletFR—IR红外分光光度计、Cintra10e紫外可见分光 光度计、Perkin—Elmer240C型元素分析仪、LCT．1型DSC热重分析仪、高压灭菌锅、恒温培养箱 (37。C±0．3。C)、恒温水浴锅、电泳仪、电泳槽、台式离心机、磁力搅拌器。 (2)试剂：CuCl22H20，OP：邻菲哕啉(C12H8N2H20)，无水乙醇，Tris：三羟甲基氨基甲 为生化试剂外，其余试剂皆为分析纯。 (3)溶液 Tris、27．5 L 溶液1：5倍体积的TBE贮存液(5xTBE)，即1000mL溶液含有54 g g硼酸、0．5mol 一1EDTA20 mL、pH=8．0。TBE为Tds—H3803一EDTA溶液。 溶液2：6x凝胶加样缓冲液(溴酚蓝0．25％，蔗糖40％(w／v))。 S实验步骤， 5．1配合物Cu(OP)2C12的合成【4】 mmol mmol 称取5 OP和2．5 mL乙醇和30rnL水中。在48。C和搅拌 CuCl2冱-120，分别溶于30 下，将OP溶液加入CuCl22I-120溶液。反应120min后停止加热，在冷却过程中逐步析出固体。滤 出固体，以乙醇洗涤后红外灯下干燥。 5．2配合物Cu(OP)2Ch的表征 5．2．1元素分析 在元素分析仪上测定配合物的C、H、N元素含量。 5．2．2红外光谱 以KBr压片法，测定产物在400～4000cm．1范围内的红外光谱。对比配位前后的红外光谱图。 5．2．3电子光谱 以水为溶剂及参比，在190～800nm范围内测定2x10一m01．L。配体及配合物的电子光谱。 5．2．4热分解曲线 在氮气氛下，以10℃升温速率，测定配合物在25～1000。C的热分解曲线。 5．3Cu(0P)2C12与DNA的作用(酶切反应) ——964·--—— ． 首届全国高等学校实验室工作论坛 分别配制5份反应溶液：(1)pBR322DNA；(2)pBR322 DNA DNA+0．04mmol +0．02mmol L一1配合物+H202+H2A； L一1配合物+H202+H2A；(4)pBR322 mmol (5)pBR322DNA+0．06L一1配合物十H202+H2A。其中，pBR322DNA的加样量均为1此 (0．25 pg止一1)，0．3％H202的加样量均为i皿，2mM 品的配合物的加样量分别为200