B群链球菌42KD蛋白提取及免疫学效果初步探讨.pdfVIP

清．间接ELISA法测定血清I时抗体滴度。 够抗体。皮下三针免疫所产生的IgG抗体效价最 (二)测定血清皿孚G抗体滴廑的间接ELISA法： 将100％纯度的42KD蛋白抗原进行包被，20％^血 、．!一，‘■．．· j． 清白蛋白封闭，然后依次加待测血清、酶标二抗，最 o曩r“一，Ⅲ；一· 后显色，进行结果判断。 【三142KD蛋白保护效果试验 1．主动免疫保护性试验：本研究采用的是变量 免疫定萱攻击斌验。方法如下：将4周龄的N]H小 鼠柏只随机分成4组，其中3组试验组，1组阴性对 照：试验组小鼠分别免疫5腿、10腭和15懈剂量的 42KD蛋白，免疫方法和程序同免疫方案的设计接 种i阴性对照组接种生理盐水。将免疫后的小鼠于 末次免疫一周后，用GBS硼型32325菌株进行攻击， 方法同uk测定，攻击剂量为1个L％．观察存话 率，并比较分析结果。 2．被动免疫保护性实验：将心周龄的NIH雌鼠 27只随机分成3组。免疫样品分别为：42KD蛋白、 超滤上清淮缩物和生理盐水；方法同主动免疫保护 性试验免疫方法。在第三针免疫后将雌性小鼠与雄 性小鼠同笼喂养．大约18—20天左右，雌鼠繁殖，平 均每窝为8只。将产下的乳鼠在鹌小时内进行攻 击．攻击菌株为OBSIll型32325株，方法同成年小鼠 皿。测定。攻击剂量分为8个滴麈．戚察结果。比较 分析被动免疫保护效果。 结 果 一．B群链球培养殛其培养时间的确定：G酷Ⅲ 型32325株菌种在接种至5000ml液体培养基后2小 时后进人指数生长期，9小时后细菌生长达到最高 浓度。比浊法测定结果为14亿／rnl； 二．目的蛋自的提取 1．层析介质的选择：在S—phae耐S-100HR凝胶 S-200HR凝胶介 介质上的分离效果最好．Seplumryl Fine凝胶介质 质上的分离效果次之。s曲ad船C,-100 上的分离效粜最差。 2．层析样品的选择：通过比较分析不同饱和度 硫酸铵沉淀样品的phac—S-IOOHR凝胶过滤层析 图谱和不同洗脱蜂浓缩产物SDS圈谱。确定 提取目的蛋白的条件与方法选择为∞％饱和度硫酸 _毡3．12．5％翱s．呻b邮叫口删霉d幽曲珥曲岫 ^：矾(卅h)：Sm；B：∞％{NU)2SO．4c：9D*(m}：sm 铵沉淀样品经s 一S-100HR凝肢过滤层析。 l{ 三．免疫愿性嬲定 ㈠免疫条件的选择 量抗原分别对小鼠迸行三针(0、14、2L)皮下免疫时， 1．最佳免疫剂量的比较与选择：5旭、10t,g、 15懈和珊唱剂量的42KD蛋白均能诱导小鼠产生 ·390· l酊抗体效价最高分别达1：J2288和I：24576；几何 滴度GI～TI值分别为8192、11722、16774。 ，F均滴度分别为5102、8883， e”嘲 l，，湖 gmoD 蔓ls啪 ；。 皂 i”啪 量 §瑚9 ’ 0 5坤 10衅／．15M20” F194．辆加m·嘶filer时l妇协421111Ⅳ岫0rdiff盯． EUSA ∞Ih口口hlj∞kb ∞ ㈣ ㈣