布鲁氏菌外膜蛋白OMP15_6表达与免疫反应原性测定.pdfVIP

试验研究 中国动物检疫 年第 卷第 期 2010 27 9 －29－ 布鲁氏菌外膜蛋白OMP15.6表达 及免疫反应原性测定 王少华，李娜，吴清民 （中国农业大学农业部人畜共患病重点开放实验室，北京 100193） 摘 要：表达羊布鲁氏菌16M 预测外膜蛋白OMP15.6，探索其作为诊断抗原的可能性。采用降落PCR 方法，从 羊布鲁氏菌16M 基因组DNA 中扩增出423bp 的基因片段，将该片段克隆于原核表达载体PGEX-4T-2 ，构建重组 表达载体。经IPTG 诱导，SDS检测，结果表明，在大肠杆菌中成功表达了外膜蛋白OMP15.6。经West- ern-blotting 检测，该蛋白能与豚鼠抗布鲁氏菌阳性血清发生特异性免疫反应，为其之后的抗原性以及免疫原性研究 奠定了良好的基础。 关键词：布鲁氏菌；外膜蛋白OMP15.6；免疫反应原性 中图分类号：S852.614 文献标识码：A 文章编号： （ ） 1005－944X 2010 09－0029－03 Expression and Antigenicity Identification of Brucella predicted Outer Membrane Protein 15.6 Wang Shaohua ，Li Na ，Wu Qingmin （MOA Key Laboratory for Zoonoses, China Agricultural University ，Beijing 100193） Abstracts：In this study，the outer membrane protein （OMP）15.6 of Brucella mellitensis 16M was expressed， and the posiibility of using this outer membrane proteins as diagnostic antigen was explored. The gene encoding OMP15.6 was obtained by touch-down PCR from Brucella mellitensis 16M genome ，and cloned into the expressing vector PGEX-4T-2. The SDSshowed that the OMP15.6 was sucssessfully expressed in E.coli. Western-blotting showed the OMP15.6 can react with hamster semrum agansit Brucella mellitensis 16M. The research provided the foundation for further study of immunogenesity and antigennisity of OMP15.6. Key words：Brucella; outer membrane protein OMP15.6; immunogenicity 布鲁氏菌病是世界范围内引起 1.2 血清与抗体 豚鼠抗布鲁氏菌每降一度2 个循环，55 ℃时10 个循 [1] 的人畜共患病重要病原体之一 。世 阳性血清由本实验室置备；羊抗豚鼠 环，72 ℃延伸90 s，共36 个循环；最 界部分地区在20 世纪 80 年代中期 I