组胺脱羧酶基因多态性与支气管哮喘的关系.pdfVIP

维普资讯 医学创新研究 2008年6月 第5卷 第 18期 MEDICINEINNOVATIONRESEARCH 基 蜀 研 宠 薯∥≯簪髫 套 曩毒∥曩≯≯ ≯誊 曩曩 曩≯ 垂禹曩善≯ ≯磐多∥ 组胺脱羧酶基因多态性与支气管哮喘的关系 李鑫 于家权。 -E、效玢 · 长春市卫生局卫生监督所(吉林 长春 130033) 。东北师范大学附属中学 【中图分类号】R562．25 【文献标识码】A 【文章编号】1671～7821(2008)18一OO46—02 支气管哮喘是由多种细胞特别是肥大细胞、嗜酸性粒细胞和 内切酶(上海 Promega公司)；MarkerLD22，000(宝生物工程有限 T淋巴细胞参与的慢性气管炎症。易感者此种炎症可引起反复 公司)；PCR扩增仪 (德国Biometra制造)；DYY一Ⅲ型稳压稳流 发作的喘息、气促、胸闷和／或咳嗽，多伴有夜间或凌晨发生气道 电泳仪 (北京六一仪器厂)；MIR—IM0恒温箱 (日本 SANYO公 对多种刺激因子反应性增高。近年来，国外支气管哮喘患病率、 司)；DELDOC凝胶成像系统 (美国BIORAD公司) ， 死亡率逐渐上升 ，全世界支气管哮喘者约 1亿人，成为严重威胁 1．4 操作方法 人们健康的主要慢性疾病。我 国的哮喘发病率为 1％，儿童达 1．4．1 提取DNA用星普液体微量DNA纯化试剂盒提取 ． 3％。支‘气管哮喘的病因非常复杂，目前认为多基因遗传性疾病， 1．4．2 聚合酶链反应体外扩增技术 (PCR反应)(1)引物序列 是位于不同染色体上多对致病基因共同作用的结果，但其是否发 为，上游引物 ：5 ATGTGGAGGGCAGGACTTYG一3下游引物：5 病与环境因素影响有关。 一 GATGCCACTIFAGCATGAGCAC一3；(2)PCR反应体系25 ， 组胺脱羧酶是催化组氨酸脱羧生成组胺的关键酶，定位在第 含双蒸水 15．7 ；10×buffer2．5 ，25mMMg2+1．5 ，10mMdNTP 15号染色体的长臂2区1带至2区2带 (15q21一q22)，其DNA 103，10pMHDC1 ，DNA4 (浓度30～60p~g／2503)，TagDNA聚 完整序列是由单拷贝基 因编码，编码区由12个外显子构成 。 合酶0．3 (1．5U／25 )。PCR扩增长度为629bp，酶切片段分别 它能增加毛细血管的通透性，刺激 胃蛋白酶及 胃酸的分泌 ，其 长271bp和358bp。(3)PCR循环条件为 94℃，5min，然后 94℃ 催化产物组胺与过敏反应及支气管哮喘有关 。其基因启动子 30s，58oC50s，72℃1min，共 32个循环，最后72℃10min，样本置人 在DNA酶 1(DNase1)和核酸内切酶参与的甲基化是组胺脱羧酶 PCR扩增仪上完成 目的基因扩增。 基因特殊表达的机制 。组胺脱羧酶具有多态性的特征 ，多态性 1．4．3 RsaI内切酶消化 取10×buffer2 ，AcetylatedBSA0．203 位点有何生物学意义及与某些常见多发病如糖尿病、高血压、冠 (10p~g／ )，10URsaI1．0 ，加双蒸水至 503，将混合物加入到 心病、支气管哮喘的遗传相关性亦值得研究，其基因多态性可能 15 PCR扩增产物中，放入37℃温箱酶解3h。 决定着个体对某些家族倾向的常见疾病的易感性。本实验 旨在 1．4．4 琼脂糖凝胶电泳 用 2％琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭着 研究组胺脱羧酶基因多态性与支气管哮喘的关系。 色。将PCR产物在 电泳仪上电泳。电压 80～100伏，时间30 1 资料与方法