t-10%2cc-12CLA促进猪卵母细胞脂质分解提高玻璃化冷冻保存效果.pdfVIP

中田畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十六届学术研讨会论文集 I t-1 0，e-1 2CLA促进猪卵母细胞脂质分解提高玻璃化冷冻保存效果 贾宝瑜，吴国权，莫显红，郑天威，傅祥伟，朱士恩‘ (中国农业大学动物科技学院北京100193) 引言 猪卵母细胞内含有大量的脂肪颗粒【lI使之对低温极为敏感，是制约冷冻保存技术发展的 主要因素。采用离心法去除胞内脂质，可有效提高冷冻后存活纠21。但脂质是卵母细胞成熟 及后期发育的重要能量来源，人为去除会影响后期发育能力。因此，提高猪卵母细胞冷冻存 活率的同时，必须兼顾后期发育潜力。反-lO，顺．12共轭亚油酸(t-10，c．12CLA)能够降低牛 胚胎在培养过程中的脂质沉积，显著提高胚胎的冷冻保存效果。本实验拟以猪卵母细胞为材 CLA 料，成熟过程中添加t．10，C．12CLA，观察成熟后卵母细胞内脂肪颗粒形态，探讨t一10，C．12 对卵母细胞冷冻保存效率的影响，为进一步优化猪卵母细胞冷冻保存方案提供参考。 材料方法 猪卵母细胞成熟培养添加t．10，C．12CLA，对MII期卵母细胞进行玻璃化冷冻；采用激光 共聚焦显微镜和透射电子显微镜观察脂肪颗粒形态及亚细胞结构；比较解冻后卵母细胞存活 率及孤雌激活后早期胚胎发育效果。 结果 CLA处理显著提高A型比例(49．08％ 类型。GV期卵母细胞多为B型(46．67％)：经t-10，C．12 粒大部分呈不均质状，脂质溢出严重，空泡化现象明显；而经t．10，C．12CLA处理者有少量脂 质溢出，未见空泡化现象。经t-10，c．12CLA处理能显著提高冷冻后卵母细胞的囊胚发育率 (7．01％Ⅷ．2．45％，p0．05)。 讨论 t．10，c．12CLA具有促进脂质代谢的生理作用。本实验结果表明，经t-10，c．12CLA处理的 猪卵母细胞脂肪颗粒直径减小，A型卵母细胞比例增加。提示t-lO，c．12CLA可促进卵母细胞 CLA处理后， 的脂质分解。冷冻后，对照组脂肪颗粒破碎、脂质溢出现象严重；而经t-10，C．12 脂肪颗粒边缘仅有少量脂质溢出，空泡化现象明显降低。此外，t-lO，C．12CLA显著提高卵母 细胞孤雌激活后的囊胚发育率，且由于A型卵母细胞比例增加，脂肪颗粒的体积变小，降低 卵母细胞的低温敏感性，有利于提高冷冻保存效果。 结论 t-10，C．12CLA处理可促进猪卵母细胞在成熟过程中的脂质代谢，减小脂肪颗粒体积，进 而提高其冷冻保存效果。 参考文献 a1．TheBseofafluorescent evaluatethe 【1】GenicotG AV,et red，to Leroy几，Soom dye，Nile lipid contentof mammalian 1 81-1194 single oocytes．Theriogenology,2005，63(4)：l of invitro at B，Ueno N，et abilityporcine 【2]Ogawa S，Nakayamaa1．Developmental maturoocytes theMII aftervitrification．J 1 1 stage Dev,20 R