参杖颗粒对大鼠实验性肝损伤IL-10、IL-12+影响.pdfVIP

参杖颗粒对大鼠实验性肝损伤 IL-10、IL-12 的影响 高清华1 段妍君1 吕文亮2，1，马维平2田梦源2王菲2 1.湖北中医药大学 430061 ⒉湖北中医药高等专科学校434020 吕文亮,通信作者，湖北中医药高等专科学校 摘要 目的：观察参杖颗粒对实验性肝损伤大鼠的血清IL-10 、IL-12 水平 和肝组织病理改变的影响，研究参杖颗粒对实验性肝损伤大鼠的肝组织的保护作 用，从而探讨参杖颗粒防治慢性肝病的药理学机制，为其临床应用提供实验依据。 关键词：方剂；慢性肝病/机制；实验性肝损伤；参杖颗粒 正文 1. 实验材料 1.1 动物 清洁级 Wistar 雄性大鼠,体重 200g ±20g, 由华中科技大学同济医 学院实验动物学部提供。 1.2 药物： 处方：参杖颗粒是由丹参、虎杖、黄芪、鳖甲等中药组成的复方中药制剂， 以上药物由湖北省中医院附属凤凰门诊部药房提供。煎剂相当于 2.0g/ml 。药物 制备方法：先将参杖颗粒用适量的水浸泡 30min 后，煎煮三次，每次煮沸后均用 文火煎煮一小时，然后过滤，分别配置浓度为 200% 的药液，以上药液均在超声 震荡器中震荡 30min 后在 3000r/min 离心取上清液备用，放在 4 ℃保存。按 70kg 成人计算，每日服用合剂量 100ml，用实验动物与人的体表面积比来进行等效剂 量换算，大鼠中剂量为 200%药液 2ml 。（相当于生药4g ） 1.3 试剂 1.3.1 冻干卡介苗制剂（DCG ）由上海生物制品研究所提供。 1.3.2 脂多糖（LPS ）由美国 Sigma 公司提供。 1.3.3 IL-10ELISA 试剂盒由武汉博士德公司提供；IL-12ELISA 试剂盒由上 海森雄公司进口分装。 1.4 仪器 HH-W21-600 电热恒温水温箱、LD5-2A 低速离心机、18MC 型酶标仪等。 2.实验方法 2.1 动物分组 对所购大鼠用普通饲料喂养一周后，将 40 只大鼠标记后按随机分为 4 组，每组雌雄各半。第一组为正常组；第二组为实验性肝损伤大鼠组，即模型组； 第三组为中药小剂量组；第四组为参杖颗粒中剂量组。 2.2 造模方法 采用卡介苗 （BCG ）加脂多糖 （LPS ）建立实验性肝损伤大鼠模型[1][2]。 注射 LPS2 小时后，取模型组大鼠，脱颈处死取其肝脏标本，观察病理切片。肝 组织出现典型的灶性坏死和大量炎细胞浸润，示造模成功。 2.4 给药处理 实验第一天除正常组外，其余组大鼠均腹腔注射 BCG8mg （约6 ×100 个活菌）。从第一天起，中药中、小剂量组开始给药，中药剂量按人与动物体表 面积换算，计算出小剂量组为 1ml/kg，中剂量组为 2ml/kg ，灌胃，每天一次。 正常组、模型组灌服生理盐水 5ml/kg，每天一次。第 12 天上午 8 时 30 分给药， 下午 3 时 30 分除正常组外所有大鼠腹腔注射 LPS （30ug/kg 体重）。下午5 时 30 分开始摘眼球取血，后脱颈椎处死，取肝右叶以 4%多聚甲醛固定，分离血清， 于-20℃冰箱中冻存待检。 2.5 观察项目与方法 2.5.1 一般情况：观察大鼠体重、精神、运动、饮食、皮毛色泽等情况。 2.5.2 血清 IL-10 、IL-12 水平测定：采用 ELISA 法，按试剂说明书操作。 2.6 数据统计与处理方法 计量资料以 X ±S 表示，组间比较用方差齐性分析及 t 检验。 二.实验结果 1 一般情况 正常组大鼠活泼喜动，眼睛鲜红而有精神，进食好，毛浓密光亮。模 型组大鼠随着实验进行变得不喜欢运动，萎靡不振，弓背喜卧，进食欠佳，毛稀 疏而干、粗乱蓬松，模型组死亡二只大鼠。中药中、小剂量组未见明显变化。 2 各组大鼠肝脏形态及病理学观察 2.1 肉眼观察 模型组大鼠肝脏形态体积明显增大，包膜紧，色较苍白，混浊无光泽； 各治疗组肝脏形态学上变化不大，色泽基本正常；正常组大鼠肝脏呈暗红色，未 见异常改变。 2.2 肝脏病理形态学改变