黄芪总苷对肝癌BEL7402细胞株抑制作用.pdfVIP

LISHIZHENMEDICINEANDMATERlAMEDICARESEARCH2011VOL．22NO．5 时珍国医国药2011年第22卷第5期 黄芪总苷对肝癌BEL一7402细胞株的抑制作用 黄熠，胡火珍4 (四川大学生命科学学院，四川成都610064) 浓度的黄芪总苷培养12，24，48h，应用MTT和流式细胞术分析黄芪总苷对细胞的作用。结果黄芪总苷对肝癌BEL一 7402细胞增殖具有明显的抑制作用并呈剂量、时间依赖性。黄芪总苷对肝癌BEL一7402细胞具有促进凋亡作用，并且上 上调p53基因表达有关。 关键词：黄芪总苷；肝癌BEL一7402细胞；增殖； 凋亡；p53基因 DOI标识：doi：10．3969／j．issn．1008-0805．2011．05．106 中图分类号：R285．5文献标识码：B 文章编号：1008-0805(2011)05-1261-02 黄芪是常用的中药，具有补气升阳，固表止汗、生津养血等功 于培养结束前4h各培养孔加入5mg／ml的MTT10IXl继续培养4 效¨J。现代药理证明黄芪可增强机体的免疫功能，临床应用的 h，吸弃孔内培养液后每孔加入DMS0100山，使结晶充分溶解，酶 抗癌方剂中多含有黄芪。2j。黄芪中含有多种有效成分，其中黄标仪测其吸光度，波长550nm。细胞生长抑制率(％)=(1一药 物组吸光度／阴性对照组吸光度)X 芪总苷是黄芪主要有效组分之一。据文献报道，黄芪总苷在体外 100％，重复测量3次，取其 对肺癌和肝癌细胞株的生长有抑制作用口’4o。本实验在此基础 平均值。 上观察黄芪总苷在体外对肝癌细胞株BEL一7402的抑制作用， 并初步探讨其抗癌机制。 法进行培养细胞48h后，黄芪总苷各组和对照组细胞分别加入 1材料与仪器 1．1样品黄芪总苷，由本实验室制备；胎牛血清，由Hyclone提酶(1g／L)240 min后，加入PI综合染液(PI浓 IXl。370C水浴30 供；RPMll640，由鼎天公司提供；MTr由Sigma公司提供；D—度：124ms／L；TritonX一100浓度：0．124％)1ml，4℃避光染色 30 Hanks液由鼎天公司提供；胰酶，由天象人公司提供；肝癌细胞株min，用流式细胞仪进行检测分析。 BEL一7402，由中国医学科学院肿瘤药物研究所提供。 2．4 1．2仪器细胞培养箱(HTl51)，由上海力申科技有限公司提“2．2”项下方法进行细胞培养48 h后，分别移人离心管中，按说 供；酶联免疫检测仪(SUNRISE)，由瑞士TECAN公司提供；BD 明书对细胞进行固定、打孔；加入p53单抗或阴性对照单抗，4℃ 流式细胞仪，由北京希尔诚兴业科技有限责任公司提供。 孵育30 2方法 mlD— 孵育30min；同法用D—Hanks液洗2次后，重悬于0．5 2．1 BEL一7402细胞培养BEL一7402细胞用含10％胎牛血清、Hanks液中，过滤，测定p53癌基因表达的比例。 100 U／“青霉素、100 mg／ml链霉素的RPMll640培养液，在2．5统计学处理采用SPSS17．0进行数据处理，计量结果以元 37％、5％CO：的恒温恒湿培养箱中培养。待细胞融合状态达±S方差表示，计数结果以百分率表示。P0．05为差异有统计 80％～90％时用胰酶消化后传代，取指数生长期的细胞用于实学意义。 验。 3结果 2．2细胞生长