电针对颈部切口痛大鼠基因表达谱和代谢物谱影响的初步研究.pdfVIP

prodynorphin and NK-1 upregulation and contributes to persistent inflammatory pain hypersensitivity[J].J. Neuroscience,2002,22(2):478-485. [9] Kawasaki Y, Kohno T, Zhuang ZY, et al. Ionotropic and metabotropic receptors, protein kinase A, protein kinase C, and Src contribute to C-fiber-induced ERK activation and cAMP response element-binding protein phosphorylation in dorsal horn neurons, leading to central sensitization[J].J Neurosci,2004,24(38): 8310-8321. [10] Cruz CD, Cruz F. The ERK 1 and 2 Pathway in the Nervous System: From Basic Aspects to Possible Clinical Applications in Pain and Visceral Dysfunction[J]. Curr Neuropharmacol,2007,5(4):244-252. 电针对颈部切口痛大鼠基因表达谱与代谢物谱影响的 初步研究* 杨永升 乔丽娜 刘俊岭 （中国中医科学院针灸研究所生化与分子生物学研究室，北京100700） 临床上，针刺治疗疼痛的疗法疗效都较为肯定。实验研究也证明电针既能缓 解急性疼痛，多次电针又能对慢性痛产生累加性缓解效应。术后痛是急性疼痛的 一种表现形式，研究表明针刺可明显缓解如口腔手术、阑尾切除术、甲状腺手术、 四肢及妇科手术后切口痛等。动物实验也证明，电针可减轻足底切口痛行为反应， 抑制足底切口痛大鼠 Aδ纤维和 C 类纤维的放电。但是，针刺对缓解术后切口痛 的作用机制目前还很不明确，本实验在颈部切口痛大鼠模型基础上，采用差异转 录组学及代谢组学的方法，检测电针治疗引起的颈部切口痛模型动物颈段脊髓中 差异转录的基因及血浆中代谢物谱的变化，以期从基因转录水平及小分子代谢物 谱的变化角度来初步探明电针在治疗术后切口痛作用中的物质基础及分子机制。 1 材料与方法 1.1 实验动物及分组 雄性 Wistar 大鼠 36 只，250g～300g，由中国医学科学院实验动物中心提供， 常规饲养一周后随机分为正常组、模型组、扶突穴组共 3 组，每组各 12 只。 * 国家重点基础研究发展计划（973计划）中医专项（2007CB512505），中国中医科学院自主课题。 120 1.2 动物模型与电针方案 动物异氟醚麻醉后，颈部局部消毒后沿颈中线做纵行切口（长约 1.5 cm）， 用眼科镊将胸骨舌骨肌钝性纵向反复分离，暴露甲状腺，轻压止血，缝合皮肤。 术后 4 h 痛阈测定后，用 4 支 28 号 15mm 长针灸针分别刺入大鼠双侧“扶突”穴， 接韩式电针仪，电刺激参数 2/15Hz ，共 30min，前 15min 1mA，后 15min 2mA。 1.3 痛阈的测定及组织提取 大鼠均在术前、术后 4 h 及针后，用辐射热测痛仪（光斑直径为 0.8cm ），对 颈部/切口部位进行痛阈测定。每只测 3 次，每次相隔约 5min，取其平均值作为 该时段痛阈值，各组间均数比较采用单因素方差分析，组间均数两两比较用最小 显著（LSD ）法。治疗结束后，大鼠戊巴比妥麻醉，腹主动脉取血，放入含有肝 素钠的 5mL 采血管中，3500rpm，4 ℃离心 10min 分离血清，-70℃保存；断头取 颈段（C1～C4 ）脊髓，放入冻存管中，即刻置入液氮中冻存后-70℃保存。 1.4 差异转录组分析 TRIZOL法提取大鼠颈部脊髓总RNA ，过柱纯化后逆转录为cDNA，然后再 对cDNA用Klenow酶标记，Cy3-dCTP标记对照组cDNA，Cy5-dC