PRRSV-PCV重组病毒的构建及PRRSV转录调控机制的研究.pdfVIP

第!届措瞒防控学术研讨含会设论文集 将杂交癌细胞株连续培养50d，分剐取第5代、第10代、第15代．第20代，第25代的培养上清 检测抗体散价，结果不同代次的杂交瘤细胞株ELISA抗体赦价基本一致(图5) 圉5杂立精细胞匏定性植测 3讨论 PRRSV自1991年首次报导以来，已得到比较渫八研究．但至今该病毒致病机理、免痖特征及 基因量白功能尚不十分清楚，该病诊断方法和疫苗也不十分理想。因此，研究PRRSV单克隆抗体， 探索PRRSV相关基因功能，已成为该病研究的重要方面。国外PRRSV单抗研究已有很多报道，并 取得很好研究进展．本研究甩高魏病性猪繁殖与砰吸综合征抗原通过差速离心和蔗糖密度梯度离心 进行纯化．用纯化的抗原长程免疫BALB／c小鼠．提高了杂交瘤细胞的阳性率．经过间接ELISA法 筛选和有限稀释法克隆，较为成功的获得了5株单抗。用该5株单抗进行的LPMA试验，具有较好 的特异性反应，从而，为进一步研究PRRSV国内分离株抗原特性和PRRS诊断技术奠定了一定基础。 用全病毒免疫小鼠．按带规方法制备单克隆抗体．经蛋白质印迹鉴定证明，5株单克隆抗体均 为针对N蛋白的单克隆抗体。PRRSV的结构蛋白中N蛋白是优势结构蛋白，免疫原性最好．能激 发强的免疫应答，而其它结掏蛋白免疫原性较弱。可能由干此原因，国外按常规方法用仝病毒免疫 制得的单克隆抗体多数为针对N蛋白的单克隆抗体．其它结构蛋白的单克隆抗体可通过其它方法制 各。 本实验获得的单克隆抗体丈部分是l窖M型，这可能与抗原的免疫弃9量有关。在小鼠体内，高剂 量抗原诱发的2次免疫为IgM型低亲和力的抗体应答．而低剂量抗原诱发Igo型高亲和力抗体应 答。而我们在以PRRSV病毒免疫小鼠时．免疫剂量偏大，达100姑。因此．推测本实验制备的杂交 瘤细胞株以IgM分珏型为主，可能与免疫量偏高有关。另外，抗原形式对抗体类型亦有影响，糖类、 可能使得分泌le,M型抗体的淋巴细胞增多，从而筛选出的单抗多为【gM型。 本实验所获得的5株针对N虽白的抗克隆抗体，蒋为今后PRRSV抗原诊断试剂盒的研制和应 用奠定良好的基础． 参考立t(培) ．十非姘{。M}。。￡m自：；；：箍‘轰i喜嚣：n¨。女。§。。：4琳 m太荦善E学院广《广州510642) 辅妻痔嚣H猪繁殖与啐嘎肄舍征病毒(P吐sv)毒束性eDNA克№作为外是基日表t栽镕∞■行性d置利月重 pP．RSV 基因的擒～目时也导致重n藕毒启月新的TRS自产生三紊新t基因组．其中镏n叫^22．曾nRN舡3和sEmRNA2A ORF2的起*密码干 采mPCV十序刊作为启动于：*一务sEmRNA2j_}为非拄鼻型t基因组r鼻髑与PRRSV lB9 病毒病 序列作为转录启动子，为进一步解剖PRRSV复制转录过程奠定了基础． 关键词PRRSV．转录调控序列(TRS)，猪圆环病毒．表达载体 猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine and virus，PRRSV)和猪圆 reproductiverespiratorysyndrome 环病毒II型(PCV2)是引起仔猪断奶后多系统衰竭综合征的最主要元凶，给全世界养猪业带来了巨 大经济损失。目前不仅没有高效疫苗防治这两种疫病。更没有一箭双雕二联疫苗可供使用。因此， 系统的建立及应用为进一步研制PMwS多联疫苗带来了希望。但研究表明，利用动脉炎病毒的全长 ORF7的5。和3，插 感染性克隆表达外源基因时，后者常被逐步缺失。Groot等分别在欧洲株PRRSV 入禽流感血凝素蛋白的含有9个氨基酸的表位(HA tag)，在第一代虽获得能融合