人胎脑星形胶质细胞原代分离培养和鉴定.pdfVIP

第 26 卷第 17 期 第 　三 　军 　医 　大 　学 　学 　报 Vol. 26 , No. 17 　　　　 　　　　 1596 2004 年 9 月 ACTA 　ACADEMIAE 　MEDICINAE 　MILITARIS 　TERTIAE Sep. 2004 ( ) 技术方法 　　　 文章编号 2004 人胎脑星形胶质细胞原代分离培养及鉴定 Primary culture and identification of human fetal astrocytes 1 2 3 1 1 2 3 (第三军医大学西南医院 : 病理科 , 神经外科 , 重庆 400038 ; 安徽省滁州市 73091 殷育松 ,卢佳友 ,王如善 ,卞修武 　　 部队医院 ,滁州 239002) 　　提 　要 : 目的 　探索并建立人胎脑星形胶质细胞的原代培养方法。方法 　分别以组织块法和消化法分离、培养和纯 化人胎脑星形胶质细胞 ,并用形态学观察和免疫细胞化学方法进行鉴定。结果 　组织块法的培养效果优于消化细胞培养 法 ;原代培养、纯化的细胞生长稳定 ,经鉴定为星形胶质细胞。结论 　采用组织块法原代培养人胎脑星形胶质细胞 ,简单 易行、所获细胞纯度高 ,可用于体外星形胶质细胞的进一步研究。 　　星形胶质细胞的形态和功能变化是多种脑疾病过 至常规培养后 ,将细胞接种于预铺无菌盖玻片的 6 孔培养板 , 程中共同的基本改变 ,因此建立一种高效、稳定的人脑 待第 3 天细胞基本汇合后取出细胞爬片 ,常规固定 ,进行鉴定。 星形胶质细胞的原代培养方法在脑疾病发生机制和治 13 　GFAP 免疫细胞化学染色鉴定 ( ) 疗研究中具有重要意义。目前 ,正常人来源的星形胶 　　以星形胶质细胞特异性标志胶质纤维酸性蛋白 GFAP 表 达与否作为鉴定指标之一3 。采用 SP 法。鼠抗人 GFAP 抗 质细胞原代培养方法在国内外文献报道较少 ,且与其 体、SP 免疫组化试剂盒及显色剂均购自武汉博士德生物工程 它物种和类型细胞的原代培养相比 ,具有标本来源少、 有限公司 ,按说明书进行操作 ,染色前细胞经 3 %Triton ×100 及时取材不易、难以控制细胞纯度并保持细胞性状等 处理 20 min 。以 PBS 代替一抗作为阴性对照 , 阳性对照采用已 特点1 ,2 ,培养难度相对较高。本实验成功地分离、培 知 GFAP 阳性的人脑星形胶质细胞 , 以胞浆内出现明确棕黄色 养并纯化了人胎脑星形胶质细胞 ,并运用形态学、免疫