稀土元素铕标记技术的应用的研究.pdfVIP

临床检验杂志2004年第22卷第4期 ChineseJournalofClinicalLaboratoryScience，2004，Vo1．22，No．4 313 文章编号：1001-764X(2004-)04-0313-03 中图分类号：R446．6 文献标识码：A ·综述与进展 · 稀土元素铕标记技术的应用研究 宁明哲 综述 童明庆 审校(南京医科大学第一附属医院临床检验中心，南京210029) 关键词：稀土元素；铕；标记；时间分辨荧光免疫分析 时 间 分 辨 荧 光 免 疫 分 析 法 (time．resolved 2．4 标记物稳定 目前比较常用的标记物有放射性同位素 fluoroimmunoassay，TRFIA)是20世纪70年代末即已建立的一 和酶等。但是同位素标记的生物活性物质常受到半衰期短 种荧光免疫分析技术 J。1983年，Pettersson等和 Eskola等先 的限制，使得试剂货架寿命短，最长不超过 15个月。酶则因 后报告用此法测定人绒毛膜促性腺激素和胰磷酯酶A2l2]。 纯度、反应过程易受干扰、显色底物不稳定等问题，使其应用 迄今，TRFIA已成为最有发展前途的非同位素标记免疫技术 受到限制。而 Eu 与双功能螯合剂，如乙二胺 四乙酸 之一 ，该技术的关键是稀土元素的标记。本文仅就稀土元 (ethylenediamin—etetra—aceticacid，EDTA)等螯合，可形成稳定 素原子结构特点、标记技术以及TRFIA技术做简要介绍。 的螯合物，稳定性很高，标记一次，可使用数年。 1 稀土元素简介 稀土元素位于元素周期表中的ⅢB族，包括钪 (Scandium 表 1 荧光物质荧光衰变时间比较表 ， Sc)、钇 (Yttrium ，Y)和镧系元素。到 目前为止，只有铕 荧光物质 荧光衰变时间(ns) (Europium，Eu)、铽 (Terbium，Tb)、钐 (Samarium，Sm)、钕 荧光素一异硫氰酸酯 (neodymium，Nd)、镝(dysprosium，Dy)等5种被用作TRFIA 二氯三嗪氨基荧光素 丹磺酰氯 标记物，尤以Eu最为常用。为叙述简明，下面以Eu为例。 苯胺基萘磺酸 2 铕标记物的特点 若丹明B一异硫氰酯 2．1 Stokes位移大 通常荧光物质的光谱分为两部分：激 丽丝胺若丹明B磺酰氯 发光谱和发射光谱，激发光谱曲线的最大吸收波长和发射光 N．(3一芘)马来酰亚胺 谱的最大发射波长之间的差，称为 Stokes位移。普通荧光物 人血清白蛋白 质荧光光谱的Stokes位移较小(如荧光素的Stokes位移仅为 细胞色素C 28am)，因此，激发光谱和发射光谱通常有部分重叠，互相干 球蛋 白 扰严重。游离铕的荧光信号虽然相当微弱，但当Eu”与有 Eu“．B-NTA 机配位体形成配合物时，产生分子内和分子间能量传递，使 Eu“的荧光强度显著增强，Stokes位移达278am，很容易对 3 TRFIA技术 7 激发光和发射光进行波长分辨，排除激发光干扰。 TRFIA分析法是用三价稀土离子及其螯合物作为示踪 2．2 荧光寿命长 稀土元素的荧光不仅强度高，而且半衰 物，代替普通荧光物质、同位素和酶，标记激素、抗体、蛋白质 期也很长，介于 10—1000 s之间，常用的Eu”一母一NTA(母一 或多肽抗原、核酸和活细胞，当反应(如抗原抗体免疫反应， 55OOOO ●5O一∞ 萘甲酰三氟丙酮)的荧光衰变时间为7141xs。而一般的荧光 核酸探针杂交反应)发生后，用特殊 的时间分辨荧光仪