减毒沙门氏菌递呈TGEV+S%2fN双启动子基因疫苗口服免疫原性.pdfVIP

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会论文集 EV 减毒沙门氏茵递呈的TG S／N双启动子基因疫苗的 口服免疫原性 张鑫淼1，曹三杰妒，黄小波l’2．，文心田1,2，汪洋阳1，张丹·，张小会 (I．四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室，四III雅安625014； 2．四川农业大学人兽共患病研究室与猪病防治研究中心，四／II成都611130) cfu／只灌胃免疫小 鼠，测定免疫小鼠诱导的血清IgG及肠道粘膜IgA抗体动态水平，同时测定免疫小鼠的外周血及脾脏淋巴细胞增 异性的抗TGEV N双基因的免疫功能，本研究为进一步开展猪体的免疫评价奠定了基础。 关键词：减毒沙门氏茵；传染性胃肠炎；S／N双基因；小鼠；t2服免疫 免疫TGEV 猪传染性胃肠炎(Transmissiblegastroenteritis， N蛋白疫苗时，能够刺激体液及细胞免 TGE)是引起仔猪死亡的重要病毒性肠道传染病，致疫的产生14]。并且有研究表明，s、N蛋白联合应用 死率几乎为100％，在全世界范围内造成严重的经 时刺激产生的抗体滴度水平达到全病毒的84％l鄄。 济损失111。TGEV是冠状病毒属，I组冠状病毒，含TGEV通过黏膜表面感染，病毒侵入小肠黏膜 不分段的单股正链RNA，长度为28．6kb，编码的结上皮细胞后，主要对小肠粘膜上皮细胞造成损害。 构蛋白主要有s、N、M、sM。其中，S蛋白主要通 因此，开发一种新的疫苗使之通过黏膜途径进入机 过与猪氨肽酶(pAPN)的相互作用结合到靶细胞上发体，不仅能够刺激系统免疫的产生而且能够刺激黏 挥作用12]，4个主要抗原位点(A、B、c、D)位于s膜免疫的产生显得尤为重要。采用减毒沙门氏菌作 蛋白的N端，约占s蛋白的一半，其诱导产生的免 为载体不失为一种有效的方法。口服后，减毒沙门 疫保护作用几乎相当于整个S蛋白131。N蛋白主要氏菌穿过肠上皮细胞或M细胞引起感染，然后进入 在病毒RNA复制加工及装配过程中发挥重要作用， 派尔氏结(payers)或小肠其他淋巴组织内的巨噬细胞 author *Corresponding 基金项目：国家自然科学基金30901084) 作者简介：张鑫淼。女，硕士研究生，主要从事动物传染病学研究． +通信作者：E-mail：csanjie@sicau．edu．cn 一240一 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会论文集 或树突细胞内定居、复制，然后刺激局部黏膜免疫 6、8w各组随机捕杀3只小鼠，摘眼球采血，其中 的产生I。I，并且沙门氏菌可以被运送至肝、脾，刺 激系统免疫的产生17J。在沙门氏菌减毒株中， SL7207为基因Asd缺失株，大量研究表明，其可以素钠抗凝，用于检测外周血T淋巴细胞的转化率。 作为一种安全有效的口服疫苗载体刺激机体产生黏 (2)／b肠粘膜样品：同时采集小鼠完整的小肠， 膜效应…31。 置于5mL含100¨g／mLPMSF的PBS中，组织匀浆 在目前的研究中，小鼠模型广泛应用于猪传染 机研磨后制备成组织匀浆，4℃12000r／min离心 20min，取上清置于冷冻干燥机上干燥后，加入 性胃肠炎(TGEV)[14I，猪圆环病毒病(PCV)¨5l，链球 0．5mL含100 菌【161，狂犬病(RV)Il，大肠杆菌1181等的口服DNA疫 itg／mL 苗的初步研究。因此，本研究以小鼠模型对重组菌 备用。 SL7207(pVAXD—N．Sa)的口服免疫诱导规律进行评1．4免疫小鼠的特异性血