重组葡萄糖脱氢酶de酶学性质及其偶联辅酶再生.pdfVIP

重组葡萄糖脱氢酶的酶学性质及其偶联辅酶再生 余 涛 ’， 胡 蝶 2 邬敏辰 ， 汪俊卿 ， 冯 峰 ’， 顾 颖 。 (1．江南大学 药学 院，fI：苏 无锡 214122；2．江南大学 生物一r：程学 院，江苏 尤锡 2I4122；3．江南大学 无锡 医 学院 ．祀： ：无锡 214122) 摘要 ：为解决生物催化氧化还原反应中辅酶循环 问题 ，人2T-．合成密码子优化后的嗜酸热源体 ermoplasma idophihfⅢ葡萄糖脱氢酶基 因Sy~dh．于E．coliBL2l(DE3)中表达 ，粗酶液经镍 柱亲和层析获得纯化的重组葡萄糖脱氢酶SyGDH、SDS—PAGE显示相对分子质量为41．0kDa 酶学性质分析表 明：该酶的最适 pH值为 7．5，在 】【H6．0～8．0稳定 ；最适反应温度为40oC，在 55℃以下稳定：最适条件下其比活性达4．5U／rag；Zn对其有明显激活作用；该酶对 NADP的亲 和力大于 NAD且对大多数有机溶剂有 良好 的耐受性 ：对D一葡萄糖 的人_和 值分别为 28．2I¨Jn0l／L和6．5U／rag、在葡萄糖脱氢酶与羰基还原酶偶联构建的NADPH辅酶循环体 系中， 以4一氯 乙酰 乙酸 乙酯为底物 ，羰基还原酶催化产物 4一氯一3一羟基丁酸 乙酯的产率为 99．0％，是 未添加葡萄糖脱氢酶时产物产率的3．1l倍 ，表明重组 SyGDH具有为生物催化氧化还原反应提 供辅酶 NADPH 再生的能力 关键词：葡萄糖脱氢酶 ；酶学性质；羰基还原酶；辅酶循环；生物催化 中图分类号：TQ925 文献标志码 ：A 文章编号 ：】673—1689(2014)09—09l0一()7 EnzymaticCharacterizationandCoenzymeRegenerationof aRecombinantGlucose1-Dehydrogenase YU 7 ， HU Die!， WU Minth ， 4NG qit ， FENG Feng。， GU 2 (1．S(I·IoolofPharmaccuticsSciem-P．Jiangnan Ut1iv(rsity，Wuxi214122．China；2．S(Il‘IlI，l()fBiot~、tIm‘ohlg) JiangnatlUlliversity，Wuxi214122，Chi,la；3．WuxiMPdica1Sch,iol，Jiatlgnan[nK,ersil?，Wuxi214122，Chilm．) Abstract：A codoll—optimized gene (Ilallled ’g．dh)ell()‘d‘ing a glu(o‘t4e 1一dehyl‘l’ogenase (1t’ 7hefllopht~mfzf-idol,hilum Wascloned into tl1P t)lasmid pEl、28a Llll(|ftmctionally expt’essed in Escherichia coli．The expressed elIZvnle was purit’ie(I to homogeneity using Ni—Nq’A atfinily ． hrotnat(ig[。aphy with an apparentll,oleeulat‘weight )‘f41．0 k1)a hv SI)S—PAGE analysis illul ． ． cha1a·cterizedLlsingtim modelsu1)straleofD-glu(O‘Se．Thepurit’iedre(o‘mJ) alItSyGI)H WLIS4．5U／ mgatpH 7．5alld45 ．all(IhighlystableatpH 6．