体外试验的研究中经依诺沙星与左氟沙星干扰的茶碱及代谢物的高效液相色谱法同时测定.pdfVIP

LC．151 体外试验研究中经依诺沙星和左氟沙星干扰的 茶碱及其代谢物的高效液相色谱法同时测定 MASuBucHI 徐小平陈聪 NORIK0 田中 真 (华西医科大学药学院成都610041) (第一制药(株)代谢分析研究所) 1前言 茶碱是具有治疗指数较窄而又被广泛使用的一类支气管扩张药物。在体内茶碱通过肝 药酶混合氧化系统被完全代谢。许多因素都对这一代谢过程有影响，包括共服对肝药酶系 统有作用的药物“4。尽管已有不少文章报道对茶碱及其代谢物进行测定，然而各自都存 在一些问题，如：分离效果不佳、分离时间过长以及采用梯度洗脱系统等”．本文从离子 抑制原理出发。用pH较低的甲酸作抑制剂，强烈地抑制极性较高的茶碱类化合物，同时 利用低pH有利于缩短茶碱保留时间的性质o，使实验在保证分离度的条件下又能缩短分 析时间。 2实验部分 2．1 Labo．mixer UIli NS·8： 设备E1忆LA1k弧。恒温振荡器NTS-1300；POSOL玳A ELⅣIS Envir∞岫entalsci如cc EL摇摆振荡器(SuGIYAMA．GEN co．，L脯)；SAKUMA INOTsu Modell26(BAcl(MAN，u．s．A．)ModeluV_655检 co．，Ltd)；高效液相色谱仪Goldcn u．s．A)；数据处理机c-R4A cHoMAloGRABAc(sHmIAD二砌，Japan)。 2．2 试剂 O舶e岫Iation和Ace切l】【linoph％(SIGMA，sL liver Milw，、Ⅵ，usA)，Ratmicms∞髂，依诺沙星(ENx)(第一制药，日本)，左氟沙星 (肌X)(第一制药，日本)。 2．3 色谱条件 色谱柱：oDs 80TM(150姗×4．6衄，5um，1’osoll， l“抽in： Ja瑚虬)。^=280nm；弱谊l 流动相：y(cH。cN)：y(o．1％甲酸为 口H2．65)_5：95，进样量50uL，色谱 图见图1。 2．4体外代谢酶反应和提取 该酶反应法是参照Hiroki O 2 4 6 8 10 12 14 16min K。nishi等”方法。方法要求在1mL l cea脏r 的反应液中含NADPH Fig System，ETDA 0．2mmol，L，60mmol，L Met曲ollsmwj廿1R缸LivcrMicrosomcs phosphate IS，6．rP． 7．4)，O．5咖nol，L 1．1．MU，2．3删，3．1-MX，4i，3．DMU，5 buⅡ、er(pH t}1eophyllIne 2UG-6一Pase和5mmol／L 01，L的 和1m窟microsomes；5mmol，L，G-6-P MgCl2以及5rnm ．333． NADPH。反应在37℃预孵化5min后加入NADPH开始正式反应