肿瘤抑制基因PTEN在非特指外周T细胞淋巴瘤中改变的研究.pdfVIP

Tcell otllenⅣise 非特指型外周T细胞淋巴瘤(peripherallymphoma，not specified， PTCL_NOS)是一组起源于胸腺后成熟T细胞、发生于淋巴结或结外，具有明显异质性及高 几年，基因表达谱方面的研究使我们对该肿瘤相关的病理特征、组织起源及预后情况有了更 深入的了解[2-5】。虽然有研究发现M 01，急性髓性白血病、弥漫大B细胞淋巴瘤及其他NHL 等淋巴造血系统肿瘤中存在lOq22．25缺失或者PTEN基因杂合性缺失、蛋白表达改变，我 们的前期比较基因组杂交研究也显示，PTCL-NOS存在携有P珏’Ⅳ基因的10q23重现性缺失， 但是，该基因与PTCL-NOS相关性及其临床病理学意义尚不十分明了。为此，本研究对36 例PTCL-NOS进行PTEN基因改变及其临床病理学特征的研究，旨在探讨其与肿瘤生物学 行为及预后的关系。 1、材料与方法 1．1材料 收集解放军306医院、304医院、北京军区总医院、北京友谊医院、北京同仁医院2001 年1月至2011年9月临床活检PTCL-NOS标本36例。BACDNA由英国剑桥大学刘宏祥教 HealⅡlcarc公司；NickTransl撕on试剂盒、LSI／、VCP 授惠赠；TempliPhi扩增试剂盒购自GE l0 杂交缓冲液、CEP dUTP均购自AbottMolecular、矽sis公 SpectmmG嗍l试剂盒及or锄ge 司；HumaIlCOT-l DNA购自Invi扛ogen公司。 1．2方法 1．2．1 扩增BACDNA 上在英国剑桥大学由刘宏祥教授团队完成)。后使用扩增试剂盒对DNA进行高效特异扩增， ng／山。 使DNA的浓度达到200～800 1．2．2 探针制备 取1峙DNA，应用Nick COT-lDNA、乙酸钠、无水乙醇沉淀， nick仃锄slation反应液体系中加入H啪aIl 针，向50m 70％乙醇洗涤后加入bu衔重悬，然后将所得探针与所购CEPl0探针进行混匀。 1．2．3 间期双色FISH 将上述探针混匀后滴于待杂交的玻片上，于80℃变性25分钟，45℃潮湿避光孵育2~3 天，洗涤脱水后避光晾干，加入二脒基苯基吲哚(DAPI)对比染色、封片。荧光显微镜观察， YSSD软件取图并合成图像。同时取10例慢性扁桃体炎组织作为对照。 2、 结果 2．1临床病理资料 中位年龄为53岁：6f{岁咀F22例．60岁以上14例：25倒发生于淋巴结，ll例发生在结 外；临床分期按照AIlIIAlbor分期，l～Ⅱ期13例，llI刑期23例。对所用病例均进行随 访，29例获得临床随访资料，其中16例死亡，13例存活。 22兀SH检测发现 荧光显微镜r观察，每个细胞桉轮廓用DAPI对比染色．显蓝色图像：内对照cEPl0 为绿色标记：待检测基因位点P删为罗丹明标记，呈红色。对慢性扁桃体炎标本进行标记 观察，各位点位于相应位置，信号清晰，说明探针制作成功。用此方法在石蜡包埋切片上进 行FIsH的方法具有高度敏感性和特异性，结果可靠…J。 正常体细胞为二倍体，因此正常细胞同一位点的信号为2个，如果10号染色伴着丝粒 位点(绿色标记)无异常，细胞桉内应显示2个红色信号和2个绿色信号。如果见到2个绿 色信号，只见到1个红色信号，提示有相应位点的杂台性缺失(LOH)：如果见到2个绿信号 的同时，见到3个或以上的红信号，提示相应位点拷贝增加，当红信号与绿信号比值为2 或以上，提示相应位点扩增。 在油镜下观察至少100个肿瘤细胞(尽量选择不重叠的细胞、肿瘤集中区)讨教。36 个探针均为正常信号。 图l 和CEPlO(绿色信号)无异常@P删显杂台性缺失，cEPl0无异常。 23统