提高微生物脂肪酶产量、活性与稳定性的方法研究.pdfVIP

第37卷第3期 工业微生物 V01．37№．3 2007年6月 InduStrial Jull．2007 Microbi0109y 。提高微生物脂肪酶产量、活性和稳定性的方法研究* 舒正玉，王爱玲，杨江科， 闫云君” (华中科技大学生命科学技术学院，武汉430074) 摘 要 微生物脂肪酶是一类广泛应用于诸多工业领域的生物催化剂。提高微生物脂肪酶的产 量、活性和稳定性，增强产品的市场竞争力，一直是微生物脂肪酶研究的重点和热点。本文从产脂 肪酶菌株的改造、脂肪酶基因的改良、脂肪酶发酵工程和脂肪酶后期处理等四个方面概述了提高微 生物脂肪酶产量、活性和稳定性的方法，以期为微生物脂肪酶的规模化工业生产提供方法性指导。 关键词：脂肪酶；产量； 活性；稳定性；方法 脂肪酶(又名三酰甘油酯水解酶，EC3．1．1．3)二乙酯、快中子等理化因子作为诱变剂【3j，利用低 是能一类能在油水界面或水不溶性系统中催化水 温、演化乙锭、胆盐、制霉菌素、克霉唑、琥珀酸钠、柠 解、酸解、醇解、胺解、酯化、转酯、酯交换等多种化学 檬酸钠、丁酸、己酸、三丁酸甘油酯等作为正突变筛 反应的生物催化剂，具有化学选择性、立体选择性、 选剂的诱变策略【4]，已成功应用于黑曲霉、假单胞 位点选择性和底物专一性等特点[1]，因此一直被广 菌、酵母等产脂肪酶菌株的诱变筛选。采用上述诱 泛应用于油脂加工、食品加工、医药、精细化工、去污 变和筛选方法，一般可以将脂肪酶产量提高1～10 剂的添加剂、药物合成、造纸、皮革等多种工业领 倍，最高可达40倍”J。 域[2]。尽管高等植物、动物的体内也存在脂肪酶，但 1．2脂肪酶基因的异源表达提高脂肪酶的产量 微生物脂肪酶因其种类和催化活性具有更广泛的多 对于表达量较小的脂肪酶产生菌而言，提高脂 样性、批量生产容易、生产成本低、生产周期短、酶的 肪酶产量最常用的方法之一是克隆相应脂肪酶基 稳定性好等特点而被更广泛地使用。提高微生物脂 因，然后在异源宿主菌中实现大量表达。大肠杆菌 肪酶的产量和活性，增强产品的市场竞争力；提高微 表达系统、酵母表达系统和曲霉表达系统是应用最 生物脂肪酶的稳定性，扩大其应用范围，一直是微生 为广泛的三种异源表达系统，许多脂肪酶基因在这 物脂肪酶研究的重点和热点。本文从产脂肪酶菌株 些表达系统中实现了大量表达[6]。考虑到生产成本 的改造、脂肪酶基因的改良、脂肪酶发酵工程和脂肪 和生产过程的可操作性，在脂肪酶商业化生产中，曲 酶后期处理等四个方面概述了提高微生物脂肪酶产 霉表达系统因其强大的分泌能力和成熟的发酵技术 量、活性和稳定性的方法，以期为脂肪酶的规模化工 而得到最为成功的应用。诺维信公司将克隆的 业生产提供方法性指导。具体催化反应中影响脂肪 酶活性和稳定性的各种因素不在本文的讨论范围 内。 RM TLIM Novoz)吼435、LipozymeIM、Lipozyme 等脂肪酶制剂均是以遗传改良的A．o，．v嬲8作为异 l 改良菌种以提高脂肪酶的产量和稳定性 源表达宿主菌发酵生产的。 1．1 常规理化诱变因子的诱变作用提高脂肪酶的 1．3脂肪酶基因的同源表达提高脂肪酶的产量 产量