脱氧雪腐镰刀菌烯醇致小鼠胚胎畸形骨骼组织基因表达谱的改变.pdfVIP

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2015-08-03 发布于安徽
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脱氧雪腐镰刀菌烯醇致小鼠胚胎畸形骨骼组织基因表达谱的改变.pdf

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第十届中国生物毒素学术研讨会脱氧雷腐镰刀菌烯醇致小鼠胚胎畸形骨骼组织基因表达谱的改变于爱莲‘，朱小明，赵英会，张忠，庄东明泰山医学院病原学教研室．泰安市271000 霉烯族毒素。广泛的存在于自然界并大量污染粮食，通过摄食而引起人类中毒性疾病。近几年研究发现，DON具有多种细胞毒性，干扰和抑制正常免疫系统、损伤内脏组织及其细胞、影响人上皮细胞的复制、损伤DNA和干扰核苷酸的正常代谢，并导致多发性骨骼畸形。目前关于DON致骨骼畸形的基因水平的研究国内外尚未见报道。本研究应用NimbleGen超高密度和高灵活性为一体的微阵列技术平台观察正常骨骼和畸形骨骼的基因表达谱的改变。研究目的：探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇导致小鼠胚胎畸形骨骼基因表达谱的变化，进一步阐明DON致骨骼畸形的分子机制，为研究真菌毒素或其它物质的致畸作用提供技术平台。研究方法将12只孕鼠随机分为正常对照组和实验组，每组6只，正常对照组不做任何处 DON，总剂量为理，实验组小鼠于孕期第7～10天连续腹腔注射给药，每天2．5mg／kg 10mg／kg．制备骨骼畸形模型。染毒后第18天剖腹取出胎鼠畸形骨骼组织和正常对照组骨骼组织。提取骨骼组织总RNA,随后用反转录法将两种组织的mRNA分别进行荧光标记，与含有小鼠44170个基因的芯片进行杂交。探针长度为60 4000B扫 mer,杂交信号用Genepix 描仪扫描，通过芯片图像分析软件Genepix 骼组织与正常骨骼组织的差异基因，通过聚类分析对样本进行分组，并经基因本体学(gene ontology，Go)分析软件对骨骼组织差异表达基因的生物学功能进行基因分类和注释基因的功能。随机选择lO个差异表达基因，用荧光定量RT-PCR验证。研究结果在小鼠全基因组芯片上筛选到差异表达基因972条，其中下调455条(包括未知基因30条)，上调517条 (包括未知基因29个)；荧光定量RT-PCR验证结果发现，选择的10个基因虽然在两种组织中的变化倍数不完全相同，但变化的方向与基因芯片检测结果一致，证明基因芯片结果准确可靠。研究结论高剂量染毒DON导致胎鼠畸形骨骼与正常胎鼠骨骼组织有明显不同的基因表达谱，在生物过程和分子功能上有较大差异，绝大多数变化的差异基因与骨骼发育、细胞调节、信号传导、发育过程和离子结合有关。这些小鼠骨骼组织的生物学信息学，为从分子生物学角度探索DON致畸的分子机制奠定基础。【关键词】脱氧雪腐镰刀菌烯醇：胎鼠；骨骼：畸形：基因表达通讯地址：山东泰安市迎胜东路2号，泰山医学院病原学教研室 68