木瓜蛋白酶酶解鱼鳞蛋白的工艺初探.pdfVIP

三、海洋资源开发与利用 木瓜蛋白酶酶解鱼鳞蛋白的工艺初探卡 唐旭木，杨丽虹，吴琴琴，何建林，徐长安，张怡评 (国家海洋局第三海洋研究所海洋生物资源化学与化工研究中心，福建厦门361005) 摘要：研究了木瓜蛋白酶水解鱼鳞蛋白的单一影响因素，并采用以34)正交实验，考察了温 度、时间、酶量、底物浓度等因素对水解鱼鳞蛋白的影响。确定了木瓜蛋白酶水解鱼鳞蛋白 工艺条件，即温度65℃，时间75 min，酶量49／L，底物浓度10％，适合工业化生产。 关键词：木瓜蛋白酶；鱼鳞蛋白；水解 改革开放以来，海洋水产品加工方面取得了长足的进步。也产生了占30％的废弃物， 其中有10％的左右鱼鳞资源未得到很好利用llJ。鱼鳞中含有丰富的胶原蛋白，是动物体内含 量最丰富的蛋白质12】。具有促进伤VI癔合和组织修复的重要功能网。同时水解鱼鳞蛋白的主 要产物胶原肽，也具有保护胃粘膜、抗溃疡、抑制血压上升，促进骨形成、皮肤胶原代谢等 营养及生理功能，在食品及医药等领域具有巨大的开发前景【4】。由于目前，陆生动物资源的 生物危险性不断增大，因此，水生动物资源特别是丰富的海洋生物资源越来越受到关注。本 文主要探索木瓜蛋白酶酶解海洋鱼鳞蛋白的工艺条件，为进一步开发利用海洋鱼类资源，制 造功能性食品探索新的途径。 1实验材料、仪器和方法 1．1实验材料 美国红鱼鱼鳞：购自福建东山，经洗涤、脱脂和脱钙处理后干燥备用。 电子天平：METTLERToLEDOALl04型。 离子色谱：美国DionexICS．3000型离子色谱。 色谱柱：氨基酸分析柱(DIONEX PA．102x250mm)。 Aminopac 烘箱：上海恒一科学仪器公司，DHG一9240A型。 M5型。 酶标仪：美国分子仪器公司，SpectraMax PB一10型。 pH计：Sartorius 磁力搅拌器、碱式滴定管 其他化学试剂均为分析纯。 1．2实验工艺流程 脱脂脱钙鱼鳞一前处理一酶解一灭酶一离心过滤一酶解液。 1．2．1离子色谱条件 流动相：250mM氢氧化钠．1M醋酸钠一水，梯度洗脱；柱温：30℃：流速：0．25mL／min； 进样量：259L。 ’基金项目：国家海洋局第三海洋研究所科研基本业务费(海三科2009006) +通讯作者：xtan9927@gmail．corn 792 ★第五届青年海洋科学研讨会论文集★ 1．2．2分析方法15】 氨基酸态氮——甲醛滴定法 粗蛋白——微量凯氏定氮法 氨基酸显色反应——茚三酮显色法 水解度——以水解液中的肽键数目与原料中总肽键数目的百分数表示， 水解的肽键数目 即：DH2原再丽丽诵丽x100％ 2方法 2．1酶解前处理 脱脂脱钙干鱼鳞称重，在稀碳酸氢钠溶液中浸泡过夜，然后用清水洗至中性。80。C加热 5小时预处理。 2．2pH对酶解效果的影晌 59干鱼鳞经预处理后，分别加入不同pH的缓冲液150mL，缓冲液的pIa值分别为5．5、 待溶液冷却后，离心，取上清测定酸溶性多肽得率。 2．3温度对酶解效果的影响 取59干鱼鳞经预处理后，加50mL蒸馏水和0．29木瓜蛋白酶，凋pH值为6．0，分别于 40、50、55、60、70℃下进行酶解，离心，测定鱼鳞水解后的多肽得率。 2．4酶解时间对酶解效果的影响 下进行酶解，酶解时间分别为75、90、120、142min，然后离心，测定鱼鳞水解后的多肽得 率。 2．5酶用量对酶解效果的影响 取5份59干鱼鳞经预处理后，加50mL蒸馏水，调pH值为6．0，于60。C进行酶解，酶 解时间为90min，酶量分别为0．1、0．15、0．2、0．25、0．39，离心，测定水解后的多肽得率。 2．6正交实验 在酶解鱼鳞蛋自工艺中，有诸多影响相互制约、相互依赖。经过初步实验，选定温度、 时间、酶量以及底物浓度为主要影响因素，pH设定为6．0。通过t,9(34)正交实验，确定鱼鳞 蛋白水解最佳工艺