熊猫犬瘟热病毒的进化地位的研究.pdfVIP

熊猫犬瘟热病毒的进化地位研究 李金中何洪彬胡贵学 范泉水余春郑先春 黄耕武银莲夏咸柱殷震 (解放军农牧大学军事兽医研究所) 摘要本文对致死大、小熊猫和犬的各一个犬瘟热病毒株的H蛋白基因进行了研究，应用RT-PCR从病料或细胞 培养物中，分3段扩增出了3个毒株H蛋白的前部分基因，经序列分析均为1641bp。将测定的3个毒株的序列与 析，实验结果表明：大、小熊猫毒株的亲缘关系均最近，在氨基酸水平上，它们与其他毒株的亲缘关系由近到远依次 为：美国的4个毒株和一个丹麦貂毒株、欧洲的3个毒株、日本的两个毒株、长春及格陵兰犬毒株、两个疫苗弱毒株。 关键词熊猫犬瘟热病毒进化 大熊猫是我国特有的一个高度濒危的物种，小熊猫是国家二级保护动物[1】。这两种动物发生犬瘟热的 病例国内外均有报道∞]。去年我们实验室接到了动物园送检的2份大熊猫和4份小熊猫的病料，诊断为犬 瘟热病毒与冠状病毒混合感染所致[…。为了进一步研究该病的病原、诊断、免疫与预防。我们对大、小熊猫 犬瘟热病毒的进化地位进行了研究，现将结果报告如下。 1材料与方法 1．1病料来源 死亡大熊猫的肝脏，小熊猫的DK细胞培养物，长春某死亡犬的肝脏。 】．2犬瘟热病毒引物的设计、合成与相对位置 选择了犬瘟热病毒中最易受外界影响的蛋白一附着蛋白(H)为研究对象，其引物在CDVH基因上的位 置如图1所示…5。 F2051 436 901 H 1496 I． +一P8 + rrlRNA 635 H 1013 1661 66 L 图l犬瘟热病毒附着蛋白基因引物的相对位置示意图 注：图中的字母P代表融合蛋白基因，H代表附着蛋白基因，L为大蛋白基因，P为引物。数字为该引物的5’端在相应基因上的位置。Pl P2片段的长度为792bp，P3—1)4的长度为578bp，P5一P6的长度为761bp，P7一P8的长度为521bp。 1．3 RNA的制备、反转录及PcR 参照李金中等报导的方法蚓6进行。 1．4 PCR产物片段的纯化及序列分析 由日本宝生物工程(大连)公司完成。 1．5大、小熊猫犬瘟热病毒H基因的序列分析与比较 应用DNASIS和PROSIS软件与GENBANK中现有的CDV H基因进行比较。 129 2结果 2．1 RT—PCR对各种病毒材料的扩增结果 一P4、P5一P6之间的片段，而未扩增出P7一P8片段。 2．2大、小熊猫及犬的CDV毒株H基因的部分序列分析结果 ere他TACC从C^亡W锄GGT 1 砧∞Cm科埘幽ACJtAIG l H L S Y 口 D K V G Gctnt CTGTCC ‘l GCCncTATmGATAATCn^n TCAtccmTTA ^ S L ：a A F Y K D N ^。R N j 9 K ■ }‘∞mm％C¨∞GC。cmmCncccmmmmm 2‘ v T E t 0 G a R R p ， Y L L ， V cTcmGa^肌mCccmmC盯AIC^订cc^