含辛伐他汀药物血清对兔血管平滑肌细胞增殖的直接作用及意义.pdfVIP

维普资讯 矗■珥学 赫 ，2004，14(2)：2729 ⑥ 2004 ∞ i JOURNALOFMICROCIRCI~ TIOM 含辛伐他汀药物血清对兔血管平滑肌 细胞增殖的直接作用及意义 覃 军 何作云 李爱民 耿建萌 [中图分类号] R972 [文献标识码] A [文章编号] 1005—1740(2004)02—0027—03 移入 25m1玻璃培养瓶 内，以5mm间隔摆放于瓶 —团■一究表明，他汀类药物!在抗高动脉螽粥样硬化底并吸净瓶内培养液 ，盖好瓶盖 ，培养瓶置人 37℃、 5％co2培养箱内3h，待组织块快干涸并与瓶底粘 定他汀类药物通过直接作用于血管壁的抗 AS作 附时，加入含 20％胎牛血清 (FCS)的 M199(Sig． 用 J。本研究采用改进血清药理学方法观察辛伐 ma)，缓缓翻转培养瓶使组织块完全浸入培养液中， 他汀对体外血管平滑肌细胞增生的影响，探讨辛伐 小心放回培养箱内(切勿使组织块漂浮)，在上述条 他汀对血管平滑肌细胞的直接作用及意义。 件下静置培养4天再换液。以后 2～3天换液 1次， 至 VSMC长满瓶底时传代。兔胸主动脉 中膜组织 1 材料与方法 块经贴壁静置培养后第 3～4天 ，有部分细胞从组织 1．1 主要试剂及仪器 块中迁出，第 4～8天逐渐有大量细胞从组织块周围 辛伐他汀(20mg／片)为杭州默沙东制药公司 迁出，细胞呈纤维样生长。10天许细胞可传代培 的分装产 品(批号 99043)，内皮素．1(ET-1)购 自 养 ，即将接近融合的原代培养 VSMC瓶内的培养液 Sigma公司，a．actin单抗购 自博士德公司，c．myc单 吸弃 ，以D-Hanks液洗 2次。加入 0．25％胰蛋白酶 克隆抗体购 自美国SANTACRUZ公司，c．1os单抗 (Sigma公司，用 D-Hank液配制 ，pH7．2)溶液使细 购 自博士德公司，小分子量 DNAmarker购 自上海 胞层刚好被液体覆盖，并轻轻转动培养瓶使分布均 复华公司。LKB1217型液体 闪烁计数器 (芬兰 匀，消化时间30s～1min。倒置显微镜下观察见细 LKB公司)，MD20型彩色图像分析仪 (Leica公司)， 胞收缩 、间隙变大、细胞变圆时迅速翻转培养瓶，弃 PCR仪 (PE公司5700型)。 去消化液 ，加入含 20％R 培养液数毫升终止消 1．2 兔主动脉血管平滑肌细胞培养及鉴定 化。用弯头吸管吸取培养液轻轻吹打瓶底使细胞脱 取一只正常喂饲雄性兔采用贴块法原代培养血 落及分散。将细胞悬液一分为二种植于新的培养基 管平滑肌细胞。处死兔后游离并剪下胸主动脉 ，)【- 内，末消失的组织块可移人新培养瓶 中继续培养。 Hanks液洗去血液，再将其移入盛有数滴 M199培 采用倒置显微镜观察及 a．actin抗体鉴定。实验用 养液的培养皿内仔细清洗 。纵行剪开血管腔 ，无血 生长稳定的第 3～6代血管平滑肌细胞。 清 M199培养液漂洗 1次，移人另一皿 中，使 内膜面 1．3 制备含药血清 朝上展开血管，用锋利双面刀片轻刮内膜面 2次。 16只雄性新西兰兔(1．10±0．13kg)随机分为 钟表镊撕除血管外膜。将余下的血管中膜转入盛有 4组 (=4)，即辛伐他汀 1#、2#、3#组 (每组每 日 适量无血清 M199青霉素小瓶内，用眼科剪将血管 分别给予辛伐他汀 5mg／kg、10mg／kg、15mg／kg) 条剪成 lITlrn×11TlIn大小的组织块。吸弃大部分培