WT1异构体比例转变对人白血病细胞株HL-60增殖和凋亡的影响.pdfVIP

理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 9()；垫 · 923 · [文章编号] 1000—4718(2013)05—0923—05 · 短篇论著 · WT1异构体 比例转变对人 白血病细胞株 HL-60 增殖和凋亡的影响术 徐 菁 ， 覃艳红 ， 张翠明 ， 乔爱秀 ， 李灵敏 ， 王宏伟 (山西医科大学 病理教研室，第二医院血液病研究所 ，第二医院超声诊断科 ，山西 太原030001) [摘 要] 目的：探讨 wT1异构体比例改变对人白血病细胞株 HL-60增殖和凋亡的影响。方法：逆转录获 得人 (17AA一／KTS一)异构体全长cDNA序列，连接到PCDH1-MCS1一EF1．copGFP慢病毒质粒载体上，酶切和测 序证实正确构建重组质粒 ，建立wT1异构体表达比例改变的单克隆细胞株。MIT法检测细胞增殖活性，形态学观 察及AnnexinV检测细胞凋亡。结果：成功构建了真核表达载体PCDH1-MCS1一EF1一copGFP—wn(17AA一／KTS一)， 转染HL-60细胞后 ，实时荧光定量 RT．PCR和Westernblotting显示重组质粒转染细胞中 l(17AA一／KTS一)mR- NA和蛋白水平明显高于空质粒转染组和正常对照组。重组质粒转染细胞的生长抑制率高于空质粒转染组和正常 对照组，差异显著 (P0．05)。加2~mo／／L三氧化二砷 (As：03)培养48h后，形态学观察发现3组细胞都出现了 凋亡形态，但重组质粒转染细胞更为明显。流式细胞术结果显示，As0，作用24h后 ，重组质粒转染细胞凋亡率较 空质粒转染组和正常对照组细胞升高，差异显著 (P0．05)。结论：增加外源性 wT1(17AA一／KTS一)异构体的表 达能抑制HL-60细胞增殖 ，促进As0诱导的细胞凋亡。 [关键词】 wTl蛋白；蛋白异构体 ；白血病；细胞凋亡 [中图分类号] R363 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000．4718．2013．05．027 TransitionofW T1isoformsinhibitsproliferationandpromotesapoptosis ofhumanleukemiacelllineHL O XUJing，TANYan-hong，ZHANGCui—ming，QIAOAi—xiu，LILing—min，WANG Hong．wei (DepartmentofPathology，InstituteofHematology，TheSecondAffiliatedHospital，DepartmentofUhrasonography，The SecondAffiliatedHospital，ShanxiMedicalUnive~i@，Taiyuan030001，China．E—mail：xujing1973@hotmail．corn) [ABSTRACT] AIM：TostudythepotentialeffectsofexogenousWilmstumor1(WT1)isoformsontheprolifera· tionandapoptosisofhumanleukemiacelllineHL-60．METHODS：WT／(17AA一／KTS一)geneobtainedbyRT—PCR wasclonedintoaPCDH1．MCS1．EF1．copGFPplasmid．Therecombinantplasmidwasconfirmedbyenzymedigestionand sequencing．andwastransfeetedintoHL-60cellsbyLipofectamine 2000．Thestabletrna sformna tswereselectedbyG418 scree