表达GFP基因的溶瘤腺病毒对大肠癌细胞的体外杀伤作用.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(9)：1741—1746 · 1741 · [文章编号] 1000—4718(2009)09—1741—06 表达 GFP基 因的溶瘤腺病毒对大肠癌 细胞的体外杀伤作用术 周 玮 ， 朱洪波 ， 何 超 ， 黄学锋。， 方炳 良 (浙江大学医学院附属邵逸夫医院肛肠外科，浙江省生物治疗重点实验室，浙江 杭州 310016； M．D．Anderson癌症中心 ，休斯顿 美国) [摘 要] 目的：研究在端粒酶启动子驱动下表达绿色荧光蛋 白(GFP)及 5型腺病毒早期基因(E1A)基因 的腺病毒Ad／hTERT—GFP—E1对大肠癌细胞的杀伤作用及其可能的机制。方法：将不同滴度Ad／hTERT—GFP— E1感染大肠癌及正常细胞，以巨细胞病毒 (CMV)启动子驱动下表达GFP基因的腺病毒 Ad／CMV—GFP作为载体 对照，通过半数组织培养感染量 (TCID。)法测定病毒滴度及体外复制能力，然后用 M，lTI、法及细胞克隆形成试验评 价该病毒在体外对肿瘤细胞及正常细胞的杀伤作用 ，并对病毒感染后的细胞进行原位凋亡检测。结果：Ad／hTERT — GFP—E1能够在 DLD1细胞内持续复制，GFP的表达能够对病毒的感染和复制起到监测作用；MTY结果显示该 病毒对于结直肠肿瘤细胞有显著杀伤作用 ，而对于正常细胞没有明显的杀伤作用；对病毒感染后的DLD1进行细 胞凋亡检测发现Ad／hTERT—GFP—E1所引起的凋亡率显著高于对照组 (P0．01)。结论：溶瘤腺病毒Ad／hTERT — GFP—E1能够选择性地在肿瘤细胞内复制并杀伤肿瘤细胞 ，其机制与细胞凋亡的途径有关。 [关键词] 端粒 ，末端转移酶；腺病毒；结肠肿瘤 ；病毒疗法 [中图分类号] R363 [文献标识码] A KillingeffectofanGFP--expressingoncolyticadenovirusoncoloncancer cellsin vitro ZHOU W ei。 ZHU Hong—bo ，HE Chao ，HUANG Xue—feng ，FANG Bing—liang ， (DepartmentofColorectalSurgery，S RunRunShawHospital，ZhejiangUniversity，KeyLaboratoryofBiotherapyofZhe— jiangProvince，Hangzhou310016，China； D．AndersonCancerCenter，Houston，USA．E—mail：drhe@驰．edu．ca) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatethekillingeffectsanditsmechanismsoftheadenovirusinwhichthetransgene greenfluorescentprotein(GFP)andadenovirus5earlyregion1A (E1A)werebothunderthecontrolofhumantelomerase reversetranscriptasepromoteroncoloncells．METHODS：Coloncellsandnormalcellsweretreatedwithdifferenttitersof Ad／hTERT—GFP—E1．Ad／CMV —GFPinwhichthetransgenesGFPwasdrivenbyCMV promoterasthevectorcontro1． WeusedTCIDntodetectreplicationtiterinvitro．M1Trassayandclonogenicassaywereperfomr edtodeterminethekilling effectonthevirusnvitro．Insitucelldeathdetectionkitwasu