气相色谱法测定水产品中氯霉素残留量.pdfVIP

气相色谱法测定水产品中氛霉素残留量 白艳玲1，陈剑刚1，张彩虹1，王丽玲1，冯翠霞1, 谭爱军1瞿进文2 (1.珠海市疾病预防控制中心;2珠海出入境检验检疫局，广东珠海5190001) 级霉素(Chloramphenicoi,CAP)为广谱抗生素，由于其副作用大，在用于人类治病上 受到一定的限制。而在水产养殖中，则曾被广泛应用于水产动物病害的预防和治疗，造成动 物性食品中的残留。目前食品安全已成为近年来全世界特别关注的热点问题，美国、欧盟及 我国也禁止其用于鱼牧养殖中.对于CAP残留的检测方法有多种，各方法的检出限己成为 关注的焦点，欧盟对CAP的检测限降至0.1ug/kg，但目前水产品中氯霉素残留量检测方 法的检出限达到0.1ugk/g不多，这对我国检测机构是一个极大的挑战，目前有关氯霉素检 测方法的报道，液相色谱法，NCI源GC/MS法、GC/MS/MS法报道的文献较多，而气相色 谱法报道不多见，本文建立的电子捕获气相色谱法检测水产品中氛霉素残留量的方法，灵敏 度高，回收率及精密度均达到分析要求。 1实验部分 1.1仪器与试剂 口本岛津GC2010气相色谱仪配有电子捕获检测器(ECD);旋转蒸发器;固相萃取装置; 旋涡混合器;高速离心机;氮吹仪;均质器;超声波清洗器;C,B固相萃取小柱， 甲醇、乙M为色谱纯，乙酸乙醋、正己烷、氛化钠为分析纯，N,O一双(三甲基硅烷勘 三氟乙酸胺 (HSTFA)十三甲基抓硅烷 (TMCS)(99十1),纸霉素标准品 9〔9.5%), 1.2实验方法 1.2.1样品预处理 准确称取捣碎均匀样品10.008于50mL离心管中，加入5mL40g/L氛化钠，混匀后加入 15mL乙酸乙酷均质!min,超声30min，以4000r/min离心10min，吸取上清液于浓缩瓶中。 再加入15mL乙酸乙醋重复一次。合并上层提取液，置于旋转燕发器50℃浓缩至近。.5mL, 转移至lOML离心管中，并用1ML乙酸乙醋分三次洗涤浓缩瓶，并于离心管中，加入4mL40g/L 氯化钠溶液，混匀，将离心管置于氮吹仪上50℃将乙酸乙醋吹干。加4mL正己烷，旋祸混 合。.5min，以4000r/min离心3min，弃去上层有机相。重复一次。将样品提取液直接加于 依次用5mL甲醇、5mL氛仿、5mL甲醉、5mL水预处理的C,s小柱上过柱。用2mL水分 次洗涤离心管，将洗涤液加入C;e小柱上过柱，弃去流出液，氯霉素将浓缩吸附于柱上，用 5mL甲醉+水 ((5+95)洗涤C,8小柱，特淋洗液完全流出，真空抽干C,。小柱:用2X20.mL 甲醉洗脱，收集洗脱液，用氮气500C吹干。加入BSTFA+TMCS(99+1)100uL，密封后旋 涡混匀lmin，在70℃干燥箱衍生30min,氮气吹干，加入。.20mL正己烷，旋涡混匀105, 作为试样溶液，供测定用。同时做抓霉素标准系列的衍生化。 1.2.2色谱条件 DB-1701毛细管色谱柱 (30mXO.25mmi.dX0.25uM);载气:高纯氮气 (99.999%), 恒流分析，线速度:28mUmin，柱流量;1mLmin;,进样口温度2501C,检测器温度300 ℃，柱升温程序:初始温度150*C，保持1min，以25C/nun升至270C，保持12min;无 分流进样，进样量1.0uL, 2 结果与讨论 2.1样品预处理条件的选择及优化 根据撅霉索易溶于乙酸乙醋、甲醉、乙睛。微溶于水而不溶于正己烷的性质，选用乙 214 酸乙酷将样品中的氯霉素提取后，经浓缩后用正己烷抽提脱脂。文献”‘报道了乙酸乙酷加 水提取可减少水溶性杂质，本实验比较了四种提取方法①log样品加log无水硫酸钠加15mL 乙酸乙AN;flog样品加5mL水加15ML乙酸乙醋;③log样品加5mL40g/LX化钠溶液加15 ML乙酸乙Ae;.IOg样品加15mL乙酸乙醋。实验结果表明方法③效果好，杂质少，那是由 于乙酸乙酷和水共存条件下提取，组织中的水溶性杂质进入水层，相当进行一次液液萃取， 氯化钠起到盐析的作用，减少乙酸乙醋层的水溶性杂质。正己烷脱脂旋涡混合时间不能太长， 因太长容易乳化，两次脱脂不完全可增加一次，正己烷