脑源性神经营养因子对细胞外蛋白水解酶激活作用的研究.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2007，23(1)：53=57 · 53 · [文章编号】 1000-4718(2007)O1-0053—05 脑源性神经营养因子对细胞外蛋 白 水解酶激活作用的研究 孙春艳， 胡 豫 ， 王雅丹， 吴 涛， 何文娟 (华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所 ，湖北 武汉430022) [摘 要】 目的：研究脑源性神经营养因子 (BDNF)对细胞外蛋白水解酶表达和激活作用的影响。方法：体 外分离并培养人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)，RT—PCR法检测HUVEC基质金属蛋白酶 MMP一2、MMP一9和基质 金属蛋 白酶组织抑制剂TIMP—I、TIMP一2mRNA的表达，明胶酶谱检测MMP一2和 MMP一9蛋白酶活性，纤维蛋 白酶谱检测尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)蛋白酶活性，Westernblotting检测uPA、纤溶酶原激活剂抑制剂 (PA1)、 TIMP—I及TIMP一2表达。结果：在对 HUVEC增殖无 明显促进作用的浓度范围内，BDNF可促进无血清培养的 HUVECMMP一2和 MMP一9mBNA表达 ，并可促进 MMP一2和MMP一9酶原的激活产生活性明胶酶，BDNF对 TIM —I和TIMP一2的表达无明显影响。BDNF以浓度和时间依赖性方式上调 HUVECuPA和PAl—I的表达 ，并 可促进uPA的活性。结论：BDNF可激活 MMPs和uPA／PAI相关的蛋白级联。 [关键词】 脑源性神经营养因子；细胞外蛋 白水解酶；脐静脉内皮细胞 [中图分类号】 R363 [文献标识码】 A Effectsofbrain-—derivedneurotrophicfactoronextracellularproteolytic enzymes SUNChun—yah，HUYu。WANGYa—dan，WUTao。HEWen—iUna (InstituteofHematology，UnionHospital，ro,~iMedicalCollege，HuazhongUni~rsiiyofScienceandTechnoolgy，Wuhan 430022，Ch／na．E—mail：ayan0618@163．corn) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatetheeffectsofbrain—derivedneurotrophicfactor(BDNF)onextracellularpro- teolyticenzymesincludingmatrixm·etaUoproteinases(MMPs)andserineproteases，inparticular，hteurokinase—type plasminogenactivator(uPA)一plasminsysteminahumanumbilicalveinendohtelialcell(HUVEC)mode1．METHODS： TheHUVECWaBactivatdewihtdifferentdosesofBDNF(25．—200 L)fordifferenttimeperiod(6一-48h)．Reverse tranacriptase—polymerasechainreaction(RT—PCR)WasusedtoassayMMP一2，MMP一9，TIMP—I，andTIMP一2 mBNA inHUVEC．Theculturedconditionedmedium Was analyzedofrMMPanduPAactivitybygelatinzyrnographyandfi- brinzyrno