人TCA-12—2／TCB-7．1真核双表达载体的构建与表达.pdfVIP

维普资讯 生垦痘理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2008，24(3)：527—531 · 527 · [文章编号] 1000—4718(2008)03—0527—05 人 TCA一12—2／TCB一7．1真核双表达 载体的构建与表达木 张文峰， 张巨峰， 邵红伟， 王俊伟， 牟艳芳， 黄树林 (广东药学院生命科学与生物制药学院生物制药研究所 ，广东 广州 510006) [摘 要] 目的：将T细胞抗原受体基因TCA一12—2和TCB一7．1共同构建在真核表达载体pDC315，用于 哺乳动物细胞293转染研究。方法：将分离得到的淋巴细胞总RNA反转录合成cDNA，以此为模板进行 PCR扩增 得到TCA一12—2基因；以实验室保存含TCB一7．1基因的质粒为模板，扩增得到TCB一7．1基因。随后酶切，连入 载体pIRES2一AcGFP1，通过亚克隆连入载体pDC315，得到重组质粒pDC315一TCA一12—2一TCB一7．1。重组体质 粒经酶切鉴定后，并对插入的TCA一12—2和TCB一7．1基因片段进行测序 ，将鉴定好的阳性重组质粒用脂质体介 导转染293细胞 ，并通过RT—PCR和流式细胞仪检测TCA一12—2和TCB一7．1基因的表达情况。结果：TCA一12 — 2和TCB一7．1可以同时构建在载体 pDC315上，RT—PCR和流式细胞仪检测发现TCA一12—2和TCB一7．1基 因可以成功在293细胞上表达。结论：成功构建了含TCA一12—2和TCB一7．1基因的双表达载体。 [关键词] 受体，抗原，T细胞 ；载体构建；基因表达 [中图分类号] RQ78；Q813 [文献标识码] A Constructionandidentificationofeukaryoticdicistronicvectorexpressing TCA 一12—2／TCB 一7．1 ZHANGWen—feng，ZHANGJu—feng，SHAOHong—wei，WANGJun—wei，MOUYan — fang，HUANG Shu—lin (InstituteofBiopharmacology，Schoolof Science＆Biopharmacology，GnangdongPharmaceuticalCollege，Guangzhou 510006，China．E—mail：shulhuang@sina．com．c／t) [ABSTRACT] AIM：ToconstructtherecombinantdicistroniceukaryoticexpressionvectorpDC315一TCA一12— 2一TCB一7．1，whichcontainingTcellnatigenreceptor(TCR)genesTCA一12—2andTCB一7．1，nadtotrnasferthis recomb innatvectorinto293cellstoinvestigatetheexpressionofTCA一12—2nadTCB一7．1．METHODS：TheTCA— l2—2wasobtainedbyRT—PCRfrom hteTcellsna dtheTCB一7．1wasamplifiedbyPCRfrom plma idpcDNA3．1一TCB 一 7．1thatweconstructedbefore．TCA一12—2na dTCB一7．1Was clonedintovectorpIRES2一AcGFP1firstly．htensub— clonedintovectorpDC315．TherecombinantplasmidpDC315