信号肽-canstatin真核表达载体的构建及其在Eca-109细胞中的分泌表达.pdfVIP

维普资讯 堡生理苤壶 hine JournalofPathophysiology 2006，22(10)：1935—1938 · 1935 · [文章编号] 1000—4718(2006)10—1935—04 信号肽 一canstatin真核表达载体的构建及其在 Eca一109细胞中的分泌表达 侯卫红， 田 芳， 王建民， 王志超， 陈华艳 ， 薛乐勋 (郑州大学医学院细胞生物学研究室 ，河南 郑州450052) [摘 要] 目的：构建信号肽一canstatin真核表达载体并在人食管癌细胞 Eca一109中分泌表达。方法：利用 点突变技术将小鼠纤溶酶原信号肽 (SP)序列插入到载体 pEGFP—C1EGFP编码序列起始密码的后面，构建pEGFP — c1一sP载体。以pMD18T—Can为模板 ，扩增小 鼠canstatin基因，构建信号肽 一canstatin分泌型真核表达载体 pEGFP—C1一SP—Can。用脂质体转染法瞬时转染人食管癌细胞 Eca一109。利用Westernblotting检测小鼠canstatin 融合蛋白在Eca一109细胞中的分泌表达。结果：DNA测序证 明所构建的带信号肽的中间载体pEGFP—C1～SP正 确 ；酶切和DNA测序表明信号肽 一canstatin分泌型真核表达载体pEGFP—C1一SP—Can构建正确 ，EGFP—cansta- tin融合蛋白在人食管癌细胞 Eca一109中分泌表达。结论：获得了能分泌canstatin融合蛋白的真核表达载体，并分 泌到人食管癌细胞Eca一109的细胞外，为小鼠canstatin的功能研究及应用于基因治疗提供了实验基础。 [关键词] Canstatin；血管生成抑制剂；食管肿瘤；Eca一109细胞 [中图分类号] R3．63 [文献标识码] A Constructionofsignalpeptide——canstatinexpressionvectoranditssecret-· ableexpressioninEca—．109cells HOUWei—hong，TIAN Fang，WANGJian—rain，WANGZhi—chao，CHENHua—yan， XUE Le—xun (LaboratoryforCellBiology，MedicalCollegeofZhengzhouUniversity，Zhengzhou450052，China) [ABSTRACT] AIM：Toconstructsignalpeptide—eanstatinexpressionvectorpEGFP—c1一sP—Canandexpress seeretablemousecanstatinfusionproteininEca～109cells．METHODS：Site—directedmutagenesiswasusedinamplif- yingthesingalpeptideofmurineplasminogentoconstructtheplasmidpEGFP—C1一SP．ThecDNAofmousecanstatin。ob- rainedfrom acloningvectorpMDI8T—CanbyPCR．wasinsertedintopEGFP—C1一SPtoconsturctasecretableexpression vectorDEGFP—C1一SP—Can．ConstructedplasmidpEGFP—C1一SP—CanwastransientlytransfectedintoEca一109cells vialipofectamine．andsubsequentlyitssecretableexpressioninthemedium ofculturedEca一109Was observedbyWestern blotting．RESULTS：DNAsequencingandrestrictionenzymeanalysisattestedthevalidityoftheconsturctedplasmidspEG- FP—C1一SPandDEGFP—C1一SP—Can．EGFP—eanstati