亚硒酸钠对体外培养的慢性乙型肝炎患者外周树突状细胞功能的影响.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2008，24(4)：815—816、819 · 815 · [文章编号] 1000—4718(2008)04—0815—03 亚硒酸钠对体外培养的慢性乙型肝炎患者 外周树突状细胞功能的影响术 陈显兵 ， 管小琴 (湖北民族学院医学院病理教研室，湖北 恩施 445000；。重庆医科大学基础医学院病理教研室，重庆 400016) [摘 要] 目的：体外培养慢性乙型肝炎患者外周树突状细胞 (DCs)，检测其经过亚硒酸钠作用后功能的改 变。方法：(1)建立用人重组粒细胞一单核细胞刺激集落因子 (GM—CSF)、人重组 IL一4、人重组 IFN一仅等细胞因 子诱导、AIM—V培养外周血单个核细胞的方法。(2)收集慢性乙肝患者30例外周血，每份血分成2份，在诱生中 不加亚硒酸钠处理者为乙肝组，加硒者为加硒组。健康献血者 18例为对照组。(3)透射电镜观察其形态；MTr法 检测DCs对同种异体淋巴细胞的增殖能力(MLR)及ELISA法检测细胞因子IL一12的分泌和GSH—Px、MDA的活 性。结果：(1)DCs分泌 IL一12水平和刺激淋巴细胞反应能力：乙肝组明显低于对照组 (P0．05)．力口硒组比乙肝 组高 (P0．05)。(2)DCs细胞内的GSH—Px、MDA的活性：GSH—Px活性乙肝组明显低于对照组 (P0．05)；加 硒组高于乙肝组和对照组 (P0．05)。MDA的活性乙肝组明显高于加硒组、对照组 (P0．05)。结论：乙肝患者 DCs功能缺陷可能与HBV感染DCs后产生的氧 自由基损伤和GSH—Px过度消耗有关。体外经亚硒酸钠作用后的 乙肝患者的DCs功能可在一定程度上恢复，可望为以后基于DCs的慢性乙型肝炎的免疫治疗提供新思路。 [关键词] 肝炎，乙型，慢性；树突细胞 ；亚硒酸钠 [KEYWORDS] HepatitisB，chronic；Dendriticcells；Sodiumselenite [中图分类号] R363 [文献标识码] A 慢性乙型肝炎是 HBV持续感染造成的，机体免疫功能低 人重组白细胞介素4(rhlL一4)、干扰素d(IFN—d)、无血清培 下是造成HBV持续感染的原因之一 。研究发现乙肝患者 养基AIM—V购 自Gibco公司，淋巴细胞分离液(1077g／L)购 外周血单核细胞来源的树突状细胞 (dendriticcells，DCs)在 白天津TBD公司。小鼠抗人CD80(FITC)、CD86(PE)单克隆 数量、成熟状态和免疫功能上存在缺陷，与HBV特异性的T 抗体、IL一12p70ELISA试剂盒购 自晶美公司。亚硒酸钠购 细胞耐受形成有关 。我们比较慢性 乙型肝炎患者外周血 自北京中联试剂公司(AR)。MDA、GSH—Px试剂盒购 自南 单核细胞经常规细胞因子诱导的DCs经硒处理后在免疫功 京建成公司。 能及MDA、GSH—Px活性等方面的差别 ，初步探讨慢性 乙型 3 方法 肝炎患者DCs功能缺陷的机制，为以后树突状细胞用于慢性 3．1 分组 乙肝患者外周血DCs分 2份，直接培养诱导为 乙型肝炎的免疫治疗提供理论基础。硒又称抗肝细胞坏死 乙肝组；加入亚硒酸钠 (0．3mmol／L)者为加硒组 ，健康人献 因子，在保护肝细胞 、抗病毒、抗肿瘤等方面研究很多，但对 血者为对照组。 DCs的保护和功能影响方面国内外尚未见文献报道。 3．2 树突状细胞体外培养 新鲜分离抗凝外周血，淋巴细 胞分离液密度梯度离心 (25℃ 2000r／min离心 20min)，取 材 料 和 方 法 界面细胞，用 Hanks缓冲液悬浮，洗涤细胞3次，无血清培养 1 对象 基AIM—V悬浮细胞，调整细胞浓度为 5×10 cells／L，加