烟曲霉菌提取物对人支气管上皮细胞Muc5ac表达的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(2)：327—332 · 327 · [文章编号] 1000—4718(2009)02—0327—06 烟 曲霉菌提取物对人支气管上皮细胞 Muc5ac表达的影响 龙 飞， 高福生， 丁 星， 祁卉卉， 王 妍， 金先桥 (上海交通大学医学院附属第一人民医院，上海 200080) [摘 要] 目的：探讨烟曲霉菌对呼吸道上皮细胞的黏液蛋白Muc5ac表达的影响及其可能机制。方法：分 别应用不同浓度 (0、8、16、20mg／L)的烟曲霉菌提取物 (AFE)作用体外培养人支气管上皮细胞 16HBE一14o不同 的时间。实验还应用热处理的AFE(HT—AFE)、丝氨酸蛋白酶抑制剂(抑肽酶)和蛋白激酶激活受体 一2(PAR一2) 阻断剂(FSLLRY—NH)。应用细胞免疫组织化学和酶联免疫法 (ELISA)检测细胞Muc5ac蛋白量，同时应用 RT— PCR检测 Muc5acmRNA的表达。结果：正常未给予AFE刺激培养条件下的对照组细胞仅表达少量 Muc5ac，而给 予不同浓度的AFE作用后，细胞合成和分泌Muc5ac的量明显高于对照组(P0．01)，并呈明显的时间和浓度依赖 性。丝氨酸蛋白酶抑制剂和PAR一2特异性阻断剂可以明显抑制AFE的上述作用。另外，热处理的AFE蛋白酶活 性完全灭活，不能促进细胞 Muc5ac表达增加。结论 ：AFE依赖其蛋白酶活性激活受体 PAR一2，促进呼吸道上皮 细胞 Muc5ac表达增加，使黏液分泌增加。 [关键词] 曲霉菌，烟 ；支气管上皮细胞；蛋白质Muc5ac；黏蛋白类 ；受体，蛋白酶激活 [中图分类号] R363 [文献标识码] A EffectsofAspergillusfumigatusextractonexpressionofMuc5acinhuman bronchialepithelialcells LONGFei，GAOFu—sheng，DINGXing，QIHui—hui，WANGYan，JINXian—qiao (FirstPeoples’HospitalAffiliatedtoShanghaifiaotongUniversitySchoolofMedicine，Shanghai200080，China．E—mail： jinxianqiao@hotmail．corn) [ABSTRACT] AIM ：ToinvestigatetheeffectsofAspergillusfumigatusextract(AFE)ontheexpressionsof Muc5acinhumanbronchialepithelialcellsanditspossiblemechanism．METHODS：Human bronchial epithelialcells (16HBE一14o)wereculturedinvitro，whichwereexposedtodifferentconcentrationsofAFE(0，8，16，20mg／L)for differenttimes．Inordertoexplorethemechanisms，heat—treatedAFE，serineproteaseinhibitors(aprotinin)andprote- ase—activatedreceptor一2(PAR一2)antagonist(FSLLRY—NH2)wereused．TheproductionnadreleaseofMue5acin differentintervalsweretestedbyimmunohistochemistryand ELISA．TheexpressionofMuc5acmRNA wasmeasuredby RT—PCR．RESULTS：Innormal controlgroup，onlyafew Muc5acwasdetected．IntheexperimentalrgoupswithAF