氧化损伤对内皮细胞内质网应激相关蛋白表达的影响.pdfVIP

· 1540· 中国痘理生理 蠢 ChineseJournalofPathophysiology 2010，26(8)：1540—1544 [文章编号] 1000—4718(2010)08—1540—05 氧化损伤对 内皮细胞 内质网应激相关蛋 白表达的影响 刘鲁豫， 王燕萍， 王林曦， 刘小莺， 唐 莉， 刘晓红， 刘礼斌 (福建医科大学附属协和医院内分泌科，福建省内分泌研究所 ，福建 福州 350001) [摘 要] 目的：通过第三丁基过氧化氢 (t—BHP)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，建立体外氧化应激的 细胞凋亡模型，观察氧化损伤对内皮细胞内质网应激 (ERstress)相关蛋 白表达的影响。方法 ：不同浓度 t—BHP (25、50、100、200、400p~mol／L)诱导HUVECs1—24h，M1TI法观察t—BHP作用后细胞的存活率；Hoeehst／PI染色荧 光显微镜观测细胞凋亡形态；Westernblotting检测ER应激标志物肌醇需求激酶 let(IRElet)、c—Jun氨基末端激酶 (JNK)及凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase一3)的表达情况。结果：不同浓度t—BHP(25、50、100、200、 4001~moVL)诱导HUVECsl一24h后，发现随着t—BHP作用浓度的增加和时间的延长，细胞活力逐渐下降；不同浓 度 t—BHP处理 8h后，t—BHP大于25p,mol／L时，细胞凋亡率明显增加 (6．3％ ±0．6％、16．1％ ±0．9％、24．7％ ± 1．5％、23．8％ ±1．3％，P0．05)；ER应激相关信号蛋白IRElet、磷酸化 e—Jun氨基末端激酶 (P—JNK)及凋亡蛋 白caspase一3表达增加。结论：氧化应激可导致内皮细胞发生凋亡，可能与引起内质网应激相关信号蛋白的表达 有关。 [关键词] 第三丁基过氧化氢；氧化性应激；内质网应激；细胞凋亡；人脐静脉内皮细胞 [中图分类号] R363 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2010．017 Effectofoxidativedamageon expressionofendoplasmicreticulum stress ． ． relatedproteinsinhumanumbilicalvein endothelialcells LIU Lu—yu，WANGYan—ping，WANG Lin—xi，LIU Xiao—ying，TANG Li，LIU Xiao — hong．LIU Li—bin (DepartmentofEndocrinology，TheAffiliatedUnionHospitalofFujianMedicalUniversity，FujianImthmeofEndocrinolo— gY，Fuzhou350001，China．E—mail：libinliu@medmail．com．on) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatetheeffectsofoxidativedamageontheexpressionofendoplasmiereticulum stress—relatedproteinsinhumanumbilicalveinendothelialcells(HUVECs)exposedtotert—butylhydroperoxide (t—BHP)．METHODS：HUVECswereculturedinDMEMmediumwith10％FBSandinducedbyt—BHPatconcentra· tionsrangingfrom 25to400 ~moVLfor1—24 h．MTFassaywasusedtomeasurethecellviabilityafterrteatmentwith t—BHP．TheapoptoticratewasevaluatedbyfluorescencemicroscopicanalysiswithHoeehst／PIstaining．Th eendoplasmie ret