野生型stathmin1及其C末端突变体的功能研究.pdfVIP

国病理生理杂志 ChineseJournalofPath巳Y ! i 2；丝二 [文章编号] 1000-4718(2009)10—2022一O5 野生型 stathmin1及其 C末端突变体的功能研究木 张 彦 ， 熊建军 ， 王嘉励 ， 杨 光 ， 朱振宇 (广东省妇幼保健院产前诊断中心，广东广州510010；中山大学 中山医学院生物化学教研室， 达安基因公司，广东 广州510080) [摘 要】 目的：研究stathmin1过表达对黑色素细胞的生长和功能的作用；探讨C末端7个氨基酸残基的 突变对 stathmin1生物功能的影响。方法：构建 stathminl克隆载体及其 c末端定点突变载体。转染载体到黑色 素细胞中，M1Tr、流式细胞仪、分光光度法等研究野生型以及突变型 stathmin1对于黑色素细胞生长以及细胞特异 性功能的影响。结果：成功构建含有野生型 stathmin1的克隆载体 pAdTrack—stathminl及其定点突变载体 pAdTrack—stathmin1一mut；MTF法和流式细胞仪检测到突变型和野生型stathmin1都能有效抑制黑色素细胞生 长、诱导细胞凋亡；分光光度法检测黑色素细胞特异性功能黑色素产量以及酪氨酸酶活性因stathmin1的转染而受 到明显影响。结论：Stathmin1稳定表达对于黑色素细胞的生长有重要意义，高表达可以抑制细胞生长以及细胞特 异性功能，c末端模序结构的破坏并不能影响stathmin1的生物学功能。 [关键词] Stathmin1；定点突变；黑素细胞 [中图分类号] R363 [文献标识码] A FunctiOIlSofwildstathmin1andtheC terminalmutant ZHANGYan ，XIONGJian—jun，WANGJia—li，YANGGuang，ZHUZhen—yu， ( CenterofPrenatalDiagnosis，GuangdongWomen—childrenHospital，Guangzhou510010，China；Departmentof BiochemistryandMolecularBiology，ZhongshanMedicalCollege， TheDaanGeneCo．Lid．，Sun Yat—sen University， Guangzhou510080，China．E—mail：zhangyan1981 _ 2003@yahoo．COrn．ca) [ABSTRACT] AIM：Toillustratetheeffectsofoverexpressionofstathmin1onmelanocytegrowthandtherela— tionshipbetweenCterminalmotifandstathmin1function．METHODS：TheoverexpressionvectorandC temr inalmutant codingvectorwereconstructed．ThevectorsweretransfectedintomelanocytesbyLipofeetamine2000．MTI?andFCM were usedtoinspectthecellgrowth，Westernblottingwasatoolincaspase一3measurement，andspectrophotorgaphywasused todetectthemelaninproductsandtyrosinaseactivity．RESULTS：Thevectorsofoverexpressionand mutationwerecon— stmctedandtransfeetedintomelanocytessuccessfully．Bothofthem inhibitedthemelanocytergowth，inducedapoptosis， anddecreasedthe