糖皮质激素对大鼠骨折愈合方式的影响.pdfVIP

· 578 · 式的影响，以期为临床治疗此类骨折患者提供理论 显示骨痂的中央面。苏木素 一伊红 (HE)染色观察 依据。 新生小梁骨、软骨、软骨 内化骨和骨重塑等细胞组织 学形态变化。术后第 2、4、6周的HE切片以photo． 材 料 和 方 法 shopCS3．0图像分析软件计算软骨岛面积与总骨痂 1 材料 面积的比值 。 1．1 主要试剂 醋酸强的松为浙江仙居制药股份 2．5 Western 印迹检测骨痂 中Ⅱ型胶原蛋白的表达 有限公司生产，批号981220；苏木素、伊红为Sigma 骨折后第2、4周每组取5只大鼠检测骨痂中Ⅱ型 产品；水合氯醛、无水 乙醇、冰醋酸、乙二胺 四乙酸 胶原蛋白的表达。标本保存于一80oC，EDTA4oC脱 (EDTA)为国产分析纯；collagen11兔多克隆抗体和 钙 1周，冰浴 中剪碎 ，溶于 1．5mL组织裂解液 中。 辣根酶标记山羊抗兔 IgG为 SantaCruz产品。 Bradford法检测蛋 白浓度，将各组浓度调到同一水 1．2 主要器材 克氏针(直径0。5film)为上海医用 平，经 12％SDS～PAGE电泳，将分离的蛋 白转移至 缝合针厂产品；双能x线骨密度仪为 Lunar产品， PVDF膜，用5％脱脂奶粉封闭过夜，加入 collagen11 DPX—L型；电转移仪 (Bio—Rad，Trans—BlotSD 兔多克隆抗体(1：200)，摇床上振摇2h，PBST洗涤3 型)；Zwiek—ZO10测试机 (ZwickCmbHCo．Ulm)。 次，每次 10rain。再加入羊抗兔 IgC—HRP，摇床上 1．3 动物 12周龄 60只雌性 SD大 鼠(浙江大学 振摇2h，PBST洗涤3次，ECL试剂显色，干燥，显影 医学院动物中心提供)，体重 (235±16)g，饲养于完 在柯达x光片上。应用Bandscan5．0凝胶分析软件 全清洁环境，自由进食消毒颗粒饲料(ca¨18g／ ， 对Western印迹结果的灰度值进行分析。 P8g／kg，VitD1000IU／kg)，饮消毒水，室温控制于 2．6 生物力学检测 术后 6周，每组取5只大鼠用 2l℃，湿度56％，12h一】2h间隔照明，定期紫外线 于骨痂生物力学测定。取大鼠双侧胫骨，成对包裹 消毒、排风。 于生理盐水纱布中，保存于 一2OqC冰箱内。测定前 2 方法 1d标本室温下解冻，抽 出髓 内钉，在 Zwiek—ZOIO 2．1 GC性骨质疏松模型的建立 采用随机数字表 测试机上行3点弯曲实验。测试跨距为30mm，加 法将 60只sD大鼠分为实验组和对照组，每组 30 载速度为 2mm／min。测试过程 中保持标本在同一 只。实验组每天肌肉注射醋酸强的松 5mg／kgl4；对 方位并一直保持湿润，记录载荷 一位移曲线。 照组注射等容积的生理盐水。3周后，每组各取6 3 统计学处理 只，10％水合氯醛腹腔注射麻醉(350mg／kg)，当大 采用 SPSS10．0软件分析。计量资料实验数据 鼠呈现稳定的昏睡状态持续5rain以上时，使用双能 以均数 ±标准差(±s)表示。检验方法为两组独立 x线骨密度仪测定大鼠第3腰椎骨密度。 样本的t检验。 2．2 胫骨骨折 内固定模型的制备 用药 3周后，按 结 果 文献 方法建立大鼠胫骨骨折内固定模型，复位骨 折后，从胫骨平台前缘髌韧带内侧插入直径 0．5mIFl 1 体重与第3腰椎骨密度测定 克氏针至胫骨远端，行髓腔内固定。术后3d内肌注 5mg·kg一 ·d 强的松肌 肉注射 3周后，实验 青霉索(50mg／kg)。 组动物体重为 (221．6±4．7)g，对照组动物体重达 2．3 骨密度 (bonemineraldensity，BMD