野生型p53基因转染U14细胞增强肿瘤抗原的免疫原性.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2010，26(7)：1413—1415 · 1413 · [文章编号】 1000-4718(2010)07—1413—03 野生型p53基因转染 U14细胞增强 肿瘤抗原 的免疫原性 黄永红 ， 徐方云 ， 王红梅 ， 徐优慧 ， 温淦升 (南昌大学医学院病理生理学教研室，江西中医学院，江西 南昌330006) [摘 要] 目的：探讨p53基因修饰的U14细胞瘤苗能否增强抗小鼠宫颈癌U14细胞的主动免疫反应。方 法：随机将实验分3组 ：p53一UI4细胞瘤苗组、U14细胞瘤苗组、空白对照组；运用阳离子脂质体介导的转染方法， 将p53基因导人U14细胞，用含 G418的选择性培养基对已转染细胞进行筛选，以获得稳定表达相应 P53蛋白的 U14细胞，用间接免疫细胞化学方法检测P53蛋 白的表达情况。采用反复冻融法分别制备ps3一U14细胞瘤苗和 U14细胞瘤苗，在此基础上采用 Mrrr法检测经各组细胞瘤苗免疫后的小鼠脾细胞对 U14细胞的细胞毒作用。结 果：效靶比为20：1时，p53一U14细胞瘤苗组、U14细胞瘤苗组和空 白对照组刺激 的脾细胞杀伤活性分别为 64．91％、42．14％和21．66％；效靶比为40：1时，p53一UI4细胞瘤苗组、U14细胞瘤苗组和空 白对照组刺激的脾细 胞杀伤活性分别为58．87％、42．91％、8．19％。。结论：p53基因修饰的U14细胞确能提高肿瘤抗原的免疫原性。 [关键词] 基因，p53；宫颈肿瘤；脂质体；瘤苗 [KEYWORDS] Genes， 3；Cervixneoplasms；Liposomes；Vaccines [中图分类号] R363 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2010．07．035 p53基因是肿瘤抑制基因的一种，其表达的正常蛋白少 1．3 主要试剂 质粒pC53一SN3、阳离子脂质体 Lipofectin 量存在于胞核内。p53基因突变存在于大约50％以上的人类 均为本教研室贮存产品；四甲基偶氮唑蓝(methylthiazolyltet- 各种恶性肿瘤中 0。p53基因的突变通常会导致肿瘤细胞 razolium，Mar)、kDNA／胁 Ⅲ购 自华美生物工程公司；小牛 中P53蛋白的过度表达。来源于过度表达 P53蛋 白的肽可 血清购 自杭州四季青生物工程材料研究所；G418购 自北京 由主 要组 织相 容性 抗 原 (majorhistocompatibilityantigen， 博大泰克生物基因；RPMI一1640干粉培养基购 自Gibco；小 MHC)I类分子提呈，于肿瘤相关表位发挥作用，诱导产生 鼠抗人P53单抗(SC一126)购 自北京中杉生物试剂公司；辣 P53特异性的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicityTlymphocyte， 根过氧化物酶(horseradishperoxidase，HRP)标记羊抗小鼠 CTL)反应 ；一系列实验表明10％一20％的人类肿瘤患者血清 IgG购 自华美生物工程公司。 2 方法 中均存在抗P53抗体 J。说明机体存在针对P53的B细胞 2．1 质粒的提取纯化及鉴定 将含 pC53一SN3质粒的大肠 和T细胞免疫反应。因此，P53蛋白可以作为肿瘤抗原成为 杆菌进行扩增 ，参照质粒提取纯化试剂盒说明进行提取纯化 肿瘤免疫治疗的靶标。本研究采用p53基因修饰小鼠宫颈癌 质粒，再用 -／／n／d11I酶切、电泳鉴定。 UI4细胞，观察经p53修饰 U14细胞瘤苗能否增强小 鼠脾细 2．2 p53基 因的转染和筛选 收集处于对数生长期的U14 胞对UI4细胞的细胞毒作用，为进一步探讨宫颈癌的疫苗治