糖尿病大鼠肾小管PKCα和CTGF表达的动态变化.pdfVIP

维普资讯 Chine8eJournalofPathophysiology 20 垫( ； =堕 · 183 · 【文章编号] 1000—47l8(2007)01-0183一o3 · 短篇论著 · 糖尿病大鼠肾小管PKCa和 CTGF表达的动态变化 肖 瑛 ，石明隽 ， 张国忠 ， 郭 兵 。桂华珍 ， 万昌武 。 杨 勤 (贵阳医学院 病理生理学教研室， 病理学教研室，贵州 贵阳550004) 【摘 要] 目的：观察糖尿病大鼠肾小管蛋白激酶Ca(PKCa)、结缔组织生长因子(CTGF)和纤维连接蛋白 (FN)表达的动态变化，探讨相互间的关系及其在糖尿病肾病发病中的作用。方法：随机将 sD大鼠分为正常对照 组(A组)、糖尿病2周组(B组)、糖尿病4周组(c组)、糖尿病8周组(D组)、糖尿病 l2周组(E组)。用免疫组织 化学方法检测 CTGF、PKCa、FN的表达；用Western印迹法检测 CTGF蛋白表达水平；PAS染色，光镜观察肾组织的 形态改变；生化方法测定血糖、血肌酐、甘油三酯 、总胆固醇及24h尿蛋白。结果：随着糖尿病病程的进展，出现肾 小管和间质病变，肾小管表达PKCa和CTGF增多，表达部位一致，与此同步，小管间质FN表达也增加，三者之间呈 显著正相关。l2周组大鼠血糖高于其余糖尿病组，血脂和血肌酐明显高于正常对照组；蛋白尿十分显著，并且与 CTGF和PKCa呈显著正相关。结论：糖尿病状态促进 CTGF分泌增多从而使肾小管间质FN等细胞外基质沉积增 多，使肾脏肥大和纤维化 ，而PKCa参与该过程的信号转导。 【关■词] 糖尿病肾病；结缔组织生长因子；蛋白激酶 C；纤维蛋白类 [KEYWORDS] Diabeticnephropathies；Connectivetissuegrowthfactor；ProteinidnaseC；F~mncetim 【中圈分类号】 R692．3 【文献标识码】 A 有研究表明，蛋白激酶c(proteinkinaseC，PKC)、结缔组 定为已发生糖尿病。 织生长因子(conncetivetissue霉rowtllfactor，CTGF)和纤维连接 2．3 血、尿及肾组织收集 分别于实验2、4、8、12周处死各 蛋白(fibroncefin，FN)在糖尿病肾病的发病中起重要作用¨， 组大 鼠，收集24h尿，采血，分离血清，一20℃保存。用生理 但在糖尿病肾病时肾小管PKCa与 CTGF之间的关系尚待进 盐水反复灌洗肾脏，称重，一侧肾脏置 一8O℃ 保存供 West- 一 步阐明。本研究旨在观察糖尿病肾病的发病过程中肾小 era印迹检测，另一侧肾用多聚甲醛固定，石蜡包埋切片。 管PKC口和哪 的表达 ，以及肾间质 FN沉积状况，进而探 2．4 肾组织免疫组化检测 采用SABC法检测CTGF、PKCa 讨PKca和CTGF在糖尿病肾病发病中的相互关系和作用。 和FN水平 ，DAB染色。在高倍镜(4o0倍)下计数 5个视野 的肾小球中CTGF和PKCa免疫组化染色阳性细胞数或阳性 材 料 和 方 法 肾小管数，取均值；FN在显微镜测微尺 (o．5网形 目镜尺)下 1 材料 计数十字交叉点与FN阳性染色表达重合的点数，计数 lO个 1．1 动物 雄性 sD大鼠38只，体重 152—215g，购于上海 视野 (4oo倍)。取均值。 实验动物中心。 2．5 Western免疫印迹检测 肾皮质每组 lO0mg，研成匀 1．2 试剂 ①链腺佐菌素 (STZ)(华美公司)；②抗体及 浆 ，取上清测定蛋白质浓度并校准；行SDS—PAGE电泳并将 SABC免疫组化试剂盒(博士德公司)；③tissueproteinextrac- 目的蛋白转移至N