遗传性白内障小鼠晶状体的比较蛋白质组分析.pdfVIP

中国 理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(7)：1415—1419 · 1415 · [文章编号] 1000—4718(2009)07—1415—05 遗传性 白内障小鼠晶状体的比较蛋 白质组分析 季樱红 ， 卢 奕 ， 李 娜 ，金 红 ， 杨芄原 ， 孔祥银 ， 燕顺生 (复旦大学附属眼耳鼻喉科医院，上海 200031；复旦大学化学系，上海200433；中国科学院上海生命 科学研究院健康科学研究所 ，上海200025；新疆地方病防治研究所，新疆 乌鲁木齐830002) [摘 要] 目的：比较研究先天性遗传性 白内障的晶状体蛋白质表达谱的改变。方法：采用 自发的 Crygs基 因突变先天性隐性遗传 白内障小鼠模型，分别提取白内障与正常小 鼠晶状体总蛋白，进行固相 pH梯度 (IPG)等电 聚焦双向电泳，R一250染色，使用 PDQuest7．30图像分析软件分析电泳图像。选择部分差异蛋白点胶上酶解，应 用 MALDI—TOF／TOF仪器进行串联质谱 (MS／MS)鉴定及分析。结果：上样量为882 g时，白内障和正常小鼠分 别检测到(417±53)个蛋白点(n=3)和 (370±41)个蛋白点(n=3)。上样量为 190 g时，白内障和正常小鼠分别 检测到(60±7)个蛋白点和(57±5)个蛋白点(n：3)。对 s、BFSP／filensin、 、BAl、13B1、13B2和仅B等7种差异蛋 白进行了鉴定。突变小鼠晶状体正常 Jys、念珠状纤维结构蛋白(BFSP／filensin)缺失， 表达下调 (4倍)，异常 pA1、13B1、13B2和ctB表达上调 (4倍)，分子量比正常小，提示 13A1、f3B1、13B2和 B可能发生裂解。结论：蛋白质 的双向电泳和质谱分析有助于基因突变后下游蛋白的功能分析。Crygs基因突变导致 s晶状体蛋白的异常，并引起 细胞骨架蛋白(BFSP／filensin)和其它晶状体蛋白( 、[3A1、13B1、13B2和ctB等)继发改变，从而间接诱发白内障。 [关键词] 小鼠；晶体蛋白类；蛋白质组 [中图分类号] R363．1；R776．1 [文献标识码] A Comparativeproteomicanalysisoflensin congenitalinherited cataract m ice JIYing—hong ，LUYi，LINa，JINHong ，YANGPeng—yuan ，KONGXiang—yin ， YAN Shun—sheng (DepartmentofOphthalmology，EyeEⅣ Ho~ital，FudanUniversity，Shanghai200031，China；DepartmentofChem— istry，FudanUniversity，Shanghai200433，China；InstituteofHealthSciences，ShanghaiInstitutesforBiologicalSceinces， Shanghai200025，China；XinjiangInstituteforEndemicControlandResearch，Wurumuqi830002，China．E—mail：luyi _ cent@yahoo．com．cn) [ABSTRACT] AIM ：Toseparatetotallensproteinsofcongenitalinheritedcataractinmiceandtoobservetheal· terationofproteinsaftergenemutation．METHODS：Westudiedthemicewithaspontaneousmutationoferystallingamma S (Crygs)transmittedasarecessivetrait．TotalproteinswereextractedandsepraatedusingimmobilizedpH gradient (IPG)，two—dimensionalelect