乙型肝炎病毒X蛋白截短突变体的构建及其对Wnt／13-catenin信号通路转录活性的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2014，30(1)：3540 · 35 · [文章编号] 1000—4718(2014)01-0035-06 乙型肝炎病毒 X蛋白截短突变体的构建及其对 Wnt／13-catenin信号通路转录活性的影响 谢 青， 陈林林， 李 治， 单晓亮， 聂 丹，段玉洁，权会琴， 唐 霓 (重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室 ，重庆400016) [摘 要] 目的：观察乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)截短突变体在细胞内的定位及其对Wnt／~．catenin信号通 路转录活性的影响。方法 ：采用PCR克隆全长野生型HBx基因，在此基础上，分别构建融合增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因和缺失HBx基因c端49—154aa、C端85—154aa、N端 1—57aa+C端 141～154aa、N端 1—57aa 或N端 1—84aa截短突变体的表达载体 ；激光共聚焦显微镜下观察 HBx截短突变体在 HEK293细胞中的定位；采 用萤光素酶报告系统检测 HBx截短突变体对 Wnt／13．catenin信号通路转录活性的影响。结果 ：(1)成功构建了 HBx截短突变体与EGFP基因融合的表达载体。(2)野生型HBx及截短突变体在 HEK293细胞中具有不同的定 位，其中N端缺失突变体主要定位于细胞核周胞质；c端缺失突变体在胞质胞核中呈均匀分布；N端 +C端缺失突 变体的定位类似于野生型 HBx，主要定位于胞质，呈不均一的粗大颗粒 ，胞核中也有少量表达。(3)与野生型HBx 相比，HBxc端49～154aa、C端85—154fla、N端 1—57aa+c端 141～154aa、N端 1—57aa和N端 1—84fla缺 失突变体在Huh7细胞中均使Wnt／[3-catenin信号通路的转录活性明显下降，分别下降了78．7％、84．7％、75．7％、 93．8％和95,5％。结论：HBx不同截短突变体的细胞定位及对Wnt／B-eatenin信号通路转录活性不同，提示HBx 的不同功能区对 Wnt信号的转录激活发挥着不同的作用。 [关键词] 乙型肝炎病毒x蛋白；截短突变体；细胞内定位；转录活性 【中图分类号] R373．21；R394．3 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000．4718．2014．01．006 CoustructionofhepatitisB virusX protein truncatedmutantsandtheir effectson13-catenin／TCF4transcriptionalactivityin fsignalingpath- way XIEQing，CHENLin-lin，LIZhi，SHANXiao-liang，NIEDan，DUANYu-jie，QUAN Hui．qin．TANG Ni (KeyLaboratoryofMolecularBiologyofInfectoiusDiseasesDesignatedbyChineseMinsitryofEducatoin，ChongqingMedw~ University，Chongqing400016，China．E—mail：nitang@cqmu．edu．cn) [ABSTRACT] AIM：ToobservetheintraeellularlocationofhepatitisBvirusXprotein(HBx)truncatedmutant andtheirimpactsonthetranscriptionalactivityof13-eatenin／T—cellfactor4 (rCF4)inWntsignalingpathway． METHODS：Thefulllen~hofwild-typeHBxgenewasclonedbyPCR．TheC-terminalof49—154aa(HBx1)，C-temri— halof85～154aa(HBx2)，N-temrinalof1 57aaandC-temrinal141～154aa(HBx3)，N