以microRNA-21为靶标的反义寡核苷酸对人白血病K562细胞的抑制作用.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJoumalofPathophysiology 2009，25(6)：1127—1131 · 1127 · [文章编号】 1000—4718(2009)06—1127—05 以microRNA一21为靶标 的反义寡核苷酸 对人 白血病 K562细胞 的抑制作用 郭 敏 ， 李育敏 ， 费 嘉弛， 张 洹 (暨南大学医学院 血液病研究所，生物化学与分子生物学教研室，广东 广州 510632) [摘 要】 目的：探讨以microRNA一21为靶标的反义寡核苷酸对 自血病K562细胞的生长抑制效应及可能 的作用机制。方法：依据与 microRNA一21序列互补的原理 ，设计反义寡核苷酸，人工合成并全硫代修饰，在 Lipo— feetamine 2000介导下，转染 K562细胞。采用四甲基偶氮唑蓝 (MTF)法筛选最佳作用浓度，台盼蓝拒染法检测其 对细胞生长抑制的作用 ，姬姆萨染色观察细胞的形态学变化，流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期的变化。利用 荧光定量 PCR技术检测反义寡核苷酸作用后细胞内microRNA一21表达水平的改变。结果：MrITI’结果显示反义寡 核苷酸有效抑制细胞生长，分别与随机组 、空 白对照组进行比较有显著差异 (P0．05)，反义寡核苷酸作用的最佳 浓度是0．6~mol／L。台盼蓝拒染法结果显示从转染 K562细胞24h开始，反义寡核苷酸组细胞生长明显受到抑 制，抑制效应持续到72h。姬姆萨染色显示反义寡核苷酸作用K562细胞24h后，可在细胞中见凋亡小体。流式细 胞仪检测结果显示反义寡核苷酸组出现明显的亚二倍体峰，细胞周期无发生明显变化。荧光定量PCR结果显示 ， 反义寡核苷酸可有效抑制细胞 内microRNA一21的表达水平。结论：以microRNA一21为靶标的反义寡核苷酸可有 效抑制人 白血病 K562细胞的生长，并显著促进细胞凋亡。 [关键词] microRNA；寡核苷酸类，反义 ；K562细胞 ；细胞凋亡 [中图分类号] R342．7 [文献标识码] A Targeted inhibition ofmicroRNA 一21with antisenseoligonucleotideand theire ctson humanleukemicK562cells GUOMin ．LIYU—min 。FEIJia ，ZHANGYuan (InstituteofHematology，DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，MedicalCollegeofJinanUniversity，Guang— zhou510632，China．E—ma il：efeijia@ 163．con) [ABSTRACT] AIM：Toexploretheinhibitoryeffectofanti—miRNA一21oligonucleotide(AMO—miRNA一21) onhumanleukemicK562cells．METHODS：K562cellsweretransfeetedwithAMO—miRNA一21，whichwascomple— mentarytothemiRNA 一21inasequence—specificmanner．ViabilityofK562cellswasmeasuredbyMrITrassayandthe optimalconcentrationfortransfectionWas determined．Theinhibitory effectofAMO ontheK562cellgrowthwasexamined bytrypanbluedyeexclusionassayat24h．48hand72haftertransfection．GiemsasstainingWas usedtodetectmorpho— logicchangesofthetransfectedcells．Thecellapoptosisandcellcycleprorgessionwereassayedbyflo