乙型肝炎病毒X蛋白抑制SFRP5启动子的活性.pdfVIP

· 200 · 中国病理生理杂志 ChineseJourn,dofPathophysiology 2013，29(2)：200-204 [文章编号]2013)02-0200-05 乙型肝炎病毒X蛋白抑制SFRP5启动子的活性：I= 陈林林，谢 青，单晓亮，权会琴， 陈庆美，周 帆， 聂 丹，唐 霓 (重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室，重庆 400016) [摘 要] 目的：探讨乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)抑制分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)启动子活性的分子机 制。方法：扩增不同长度的SFRP5启动子区片段，构建到萤光素酶报告基因载体pGL3一Basic上，并将构建好的重 组质粒转染入正常肝细胞系LO2细胞，再分别感染编码HBx的腺病毒(Ad．HBx)或编码绿色荧光蛋白的腺病毒 (Ad．GFP)，荧光显微镜下观察病毒感染效率，检测萤光素酶活性以观察 HBx对SFRP5启动子活性的影响。结果： (1)含不同长度的SFRP5启动子区截短突变报告质粒构建成功。(2)截短突变报告质粒 的萤光素酶活性与 pGL3一Basic对照组相比，分别为 (6．32±0．40)倍 (一478bp一一+47bp)、(5．79±0．32)倍 (一811bp～+47bp)、 (3．59±0．34)倍 (一1235bp一+47bp)、(3．86±0．39)倍(一1677bp～+47bp)、(3．26±0．42)倍 (一2072bp一 +47bp)(均P0．05)。过表达 HBx可以明显抑制SFRP5启动子活性，抑制率分别为44％(一478bp一+47bp) (P0．05)、46％(一811bp～+47bp)(P0．05)、28％(一1235bp～+47bp)、24％(一1677bp～+47bp)和 40％(一2072bp～+47bp)。结论：HBx可以明显抑制SFRP5启动子区活性，可能导致SFRP5基因表达下调。 [关键词] 乙型肝炎病毒x蛋白；分泌型卷曲相关蛋白5；启动子区 [中图分类号] R373．21；R394．3 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2013．02．002 Repression ofSFRP5promoteractivitybyhepatitisB virusX protein CHENLin—lin，XIEQing，SHANXiao—liang，QUANHui—qin，CHENQing—mei，ZHOU Fan．NIE Dan。TANG Ni (TheKeyLaboratoryofMolecularBiologyofInfectoiusDiseases，MinistryofEducatoin，ChongqingMedicalUniversity， Chongqing400016，China．E—mail：nitang809@163．corn) [ABSTRACT] AIM：ToinvestigatethemolecularmechanismthathepatitisBvirusXprotein(HBx)inhibitsthe promoteractivityofsecretedfrizzled-relatedprotein5(SFRP5)．METHODS：SerialtruncatedfragmentsofSFRP5pro— moterwereamplifiedandclonedintolueiferasereportervectorpGL3一Basic．L02cellsweretransfeetedwithrecombinants， andtheninfectedwiththeadenoviralvectorexpressingHBxprotein(Ad—HBx)ortheanalogousadenovirusexpressing greenfluorescentprotein(Ad—GFP)forcontro1．Theinfectionefficiencywasexaminedunderafluorescencemicroscopeand theactivityofSFRP5 promoter