脂肪来源干细胞诱导分化为神经元样细胞的实验研究.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2007,23(4)：715-719 · 715 · [文章编号] 1000-4718(2007)04-0715—05 脂肪来源干细胞诱导分化为神经 元样细胞 的实验研究术 王红祥 ， 李宾公 ， 唐晓琼 ，赵智刚 ， 李秋柏 ， 吕 建 ， 邹 萍 (华中科技大学同济医学院附属协和医院 血液科 ，心内科 ，湖北 武汉 430022) [摘 要] 目的：研究脂肪来源干细胞(ASCs)的分离、纯化、扩增以及在体外定向分化为神经元样细胞的能 力。方法：获取并培养正常人的ASCs，倒置显微镜下观察其形态 ；流式细胞仪检测其免疫表型。全反式维甲酸 (ATRA)诱导ASCs在体外分化为神经元样细胞，倒置显微镜观察神经元样细胞的形态，逆转录 一聚合酶链反应 (RT—PCR)检测巢蛋白基因的表达；免疫组织化学染色法和 Westernblotting法检测神经丝蛋 白(NF)和神经元烯 醇化酶 (NSE)的表达。结果 ：ASCs呈纤维样贴壁生长，体外培养易扩增；ASCs表达相关抗原 CD29和CD105，不表 达 CD31、CD34、CD45和HLA—DR；不同扩增代数的ASCs经诱导剂的作用可呈现典型的神经元样细胞形态 ，巢蛋 白基因及 NF、NSE均呈阳性表达。结论：脂肪组织中分离培养的ASCs具有体外大量扩增并保持低分化状态的特 性，以及定向分化为神经元样细胞的能力 ，是一种可用于神经系统疾病治疗的种子细胞。 [关键词] 干细胞；神经元样细胞 [中图分类号】 R363 [文献标识码] A Adipose．．derived stem cellsdifferentiatetoneuron-—likecells／n vitro WANGHong—xiang，LIBin—gong，TAlNGXiao—qiong，ZHAOZhi—gang，LIQiu — bai．LU Jian ，ZOUPing (DepartmentofHematology， DepartmentofCardiology，TheAffiliatedUnionHospitalofTon~iMedicalCollege，Hna— zhong l ofScienceandTechnology，Wuhan430022，China．E—ma il：xys387@163．net) [ABSTRACT] A聊 ：Weisolatedandpurifiedadipose—derivedstemcells(ASCs)fromadiposetissueinorderto studytheircharactersandexaminetheirneurondifferentiationcapacityinvitro．M ETHODS：ASCswereisolatedandcul— tured．ThemorphologyofASCswasobservedundermicroscopeandtheirphenotypewasexaminedbyflow cytometry．All— trnasretinoicacid(ATRA)wasusedtoinduceASCsintoneuron—likecells．RT—PCRwasusedtodetecttheexpression ofnestin．ImmunohistochemistrynadWesternblottingwereusedtodetecthteexpressionofneurofilament(NF)nadneuron specificenolase(NSE)，respectively．RESULTS：ASCsdisplayedafibwblast—likemoprholoyg adheringtohteculture plate．Thecellsexpressedseveral surfaceantigenssuchasCD29andCD105，whiledidnotexpressCD31，CD34，CD45 andHLA—DR．Und