脂联素siRNA对3T3-L1细胞基础葡萄糖转运的影响.pdfVIP

· 2142· 理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2008，24(11)：2142—2146 [文章编号] 1000—4718(2008)11—2142—05 脂联素 siRNA对 3T3一L1细胞 基础葡萄糖转运的影响 孟凡萍， 王长本， 李良琼， 郝 坡 (重庆三峡中心医院临检科，重庆404000) [摘 要] 目的：构建携带小鼠脂联素(Acrp30)siRNA腺病毒载体，并检测其对小鼠脂肪细胞 Acrp30表达以 及对 313一u 脂肪细胞基础葡萄糖转运的影响。方法：设计并化学合成小鼠脂肪细胞Acrp30siRNA片段，将其亚 克隆人AdEaxyXL腺病毒载体系统，在293细胞内包装扩增为重组腺病毒。用此重组腺病毒感染331一L1脂肪细 胞，用RT—PCR和ELISA检测其Acrp30mRNA和蛋白表达。采用2一Deoxy一[H]D—glucose掺人法测定脂肪细 胞葡萄糖转运。结果：设计并构建了小鼠Acrp30基因特异性 siRNA腺病毒载体，该载体感染脂肪细胞后 ，能显著 抑制Acrp30mRNA和蛋白表达，影响333一L1脂肪细胞基础葡萄糖的转运，与对照组相比，差异显著(P0．05)。 结论：构建的Acrp30基因特异性 siRNA腺病毒载体能有效地抑制脂联素在333一u 脂肪细胞中的表达，从而影响 313一L1脂肪细胞基础葡萄糖转运。 [关键词] RNA干扰；腺病毒载体；脂联素；葡萄糖转运；333 一L1细胞 [中图分类号] R589．2 [文献标识码] A EffectsofadiponectinsiRNA ontheglucosetransportin3T3——L1adipo- cytes MENG Fan—ping，WANG Chang—ben，LILiang—qiong，HAO Po (DepartmentofClinicalLaboratory，ChongqingThree—gorgesCentralHospital，Chongqing440000，China．E—mail： mengfei2132@yahoo．com．ca) [ABSTRACT] AIM：Toconstructtheadenovirusvectorwithadiponectin(Acrp30)siRNA，andtoobserveits effectontheAcrp30expressionandglucosetransportin333 一L1adipocytes．METHODS：MouseAcrp30siRNAfrag· mentwasdesigned．synthesizedandclonedintotheadenovirusvector．333 一L1cellswereinfectedwiththetworecombi— nantadenoviruses．respectively．ThemRNAexpressionandproteinlevelsofAerp30intheseceUswereevaluatedbyRT— PCRandELISA．Glucosetransportwasmeasuredby2一Deoxy一[H]一D—glucoseincorporationmethod．RESULTS： Therecombinantadenovirusesweresuccessfullyconstructed．TheyremarkablydownregulatedtheexpressionofAcrp30at bothmRNAandproteinlevelsin331 一L1cells，anddecreasedtheglucosetransportin333 一L1adipocytes(P0．05)． CONCLUSION ：ThesiRNA expressionvectorseffectivelyinhibittheexpressionofAerp30in333 一L1adipocytes，nad decreasetheglucoset