小鼠PD鄄1基因启动子克隆鉴定和转录调控分析.pdfVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2010, 37(5): 527~533 小鼠PD 1 基因启动子克隆鉴定及转录调控分析* 1)** 1, 2)** 1) 1) 1) 1) 1)*** 郑花鸯 汤必奎 王培伟 高方健 胡晓波 龚 立 朱乃硕 (1) 复旦大学生命科学学院微生物感染与分子免疫学实验室，遗传学国家重点实验室，生物医学研究院，上海200433； 2) 蚌埠医学院生物科学系，蚌埠233030) 摘要 PD-1 分子是一种重要的免疫调控因子，目前对其自身表达调控尚未有系统的研究 对PD-1 启动子区域进行分析，克 隆构建了含PD-1 基因上游约2 kb 范围内含4 种不同长度调控序列的双荧光素酶表达载体 通过FACS 检测发现，小鼠T 巴瘤EL4 细胞稳定表达 PD-1，而骨髓瘤 Sp2/0-Ag 细胞则在佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate ，PMA) 和离子霉素 (ionomycin，IO)诱导后才表达PD-1 4 种双荧光素酶报告系统在上述两种细胞中检测PD-1 启动子各区段活性显示， 227～ - 49 bp 区域含有PD-1 核心启动子，上游 1 127～ 716 bp 含有较强正性调节元件，而在 1 685～ 1 128 bp 、 715～ 228 bp + - - - - - - 两个区域含有负性调节元件，这种正负调控区交错的启动子活性现象说明了PD-1 基因表达调控的 杂性，这些结果为PD-1 基因的表达调控提供了结构基础和依据 关键词 PD-1，启动子鉴定，转录调控分析 学科分类号 Q7 ，R3 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2009.00664 PD- 1(programmed cell death 1)分子是通过差减 的严重程度对于肿瘤病人的预后[6] 慢性病毒感染 + 杂交技术从受凋亡刺激的T 细胞中分离得 的免 如HBV 患者中CD8 T 细胞表面PD-1 表达显著上 [1] + [7-9] 疫负调控因子 ，由胞外的IgV 样基序、跨膜区、 调，且伴随着CD8 T 细胞功能的减弱 此外 胞内的ITIM(immunoreceptor tyrosine-based inhibitory PD-1 基因还和Treg 细胞的功能相关[10] motif)和ITSM(immunoreceptor tyrosine-based switch 虽然PD-1 在免疫调控中的重要作用已有众多 [2] motif)基序组成，与CTLA-4 同属于CD28 家族 ， 文献报道，但是对于其自身的转录调控机制研究还 主要表达于活化的T 细胞、B 细胞和髓样细胞表 未见系统报道 转录调节作为基因表达调控最主要 [3] 面 受抗原刺激后，PD-1 与其配体PD-L1(亦称