大鼠胫骨生长板软骨细胞的体外培养和鉴定.pdfVIP

第 3O卷 第 4s期 中山大学学报(医学科学版) Vol_3O No．4S 2009年 8月 JOURNALOFSUNYAT—SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) Aug． 2009 大鼠胫骨生长板软骨细胞的体外培养及鉴定 潘思年 t-，杜敏联 ，马华梅 ．李燕虹 (1．中山大学附属第一医院儿科，广东 广州 510080；2．中山大学附属第三医院儿科 ，广东 广州 510630) 摘 要：【目的】建立体外培养及鉴定大鼠胫骨生长板软骨细胞的方法。 【方法】采用胰酶和 Ⅱ型胶原酶序贯消化法对 5～8只3周龄 sD大鼠胫骨生长板软骨行体外分离 、培养并传至第6代、观察各代软骨细胞形态．MTF法绘制细胞生长曲 线，Ⅱ型胶原免疫组化染色，阿力新蓝染色检测各代软骨细胞外基质硫酸糖氨多糖 (GAG)含量和结构，采用逆转录聚合酶链 反应检测各代细胞 Ⅱ型胶原和 aggreacanmRNA表达水平。 【结果】体外培养的软骨细胞随着传代次数的增加，细胞形态由 原代的多角形逐渐变为长梭形；MTF比色法显示 ，4代以前 的软骨细胞的生长曲线近似…S’形，在第 4～8天细胞呈对数生 长 ，在第9～10天达平台期 ，至第 11天开始出现生长抑制。4代以前的软骨细胞 Ⅱ型胶原免疫组化呈强阳性。原代至第6代 软骨细胞的GAG含量、长链分子百分 比分别为0．35±0．04，(83．04-3．6)％；0．33±0．02，(78．7±4．2)％；0．31-40．06，(77．7-4 2．3)％：0．30±0．05，(77．0±5．3)％：0．14±0．01。(44．3±4．0)％；0．10±0．01，(39．3±2．5)％及 0．07±0．01，(28．0±2．0)％。显 示从第 4代后随着传代次数的增加逐渐下降(PO．05)，Ⅱ型胶原和aggreacanmRNA表达水平亦显著减少 (P0．05)。 【结论】本研究所采用的软骨细胞分离和培养的方法，能在短时间内获得高纯度和高存活率的软骨细胞，第 3代及以前的细 胞保留了软骨细胞的表型特征．增殖较快 。这一方法为更深入地从细胞水平研究儿童的生长提供了可靠有效的模式。 关键词 ：胫骨生长板；软骨细胞 ；细胞培养 中图分类号：R72 文献标识码：A 文章编号：1672．3554(2009)4S一0001—05 InVitroCultureand IdentificationofChondrocytesfrom TibialGrowthPlateofRats PAN Si—nian，，DU Min—lian，MA Hua-mei，LIYan-hong (1．DepartmentofPediatricsoftheFirstAffiliatedHospital； 2．DepartmentofPediatricsoftheThirdAffiliatedHospital，SunYat—senUniversity，Guangzhou510080，China) Abstract：O【bjective】Toestablishamethodforthecultureandidentificationofchondrocytesfromtibialgrowthplateofrats． M【ethod】Chondrocytesrfomtibialgrowthplateof5～8Sprague—Dawley(SD)ratsaged3weeksbytrypsin—collagenasedigestion wereculturedinmonolayerandsubcuhuredtothesixthpassagetoobservethechangesofcellmorphology． Thegrowtheurvewas detectedbyusingMTFcolorimetric．ImmunocytochemistryandRT—PCRwereperformedtoinvestigatetheexpressionofcollagen 1I attheproteinan