快速筛选高水平稳定表达成纤维细胞生长因子_21真核细胞株新方法建立.pdfVIP

快速筛选高水平稳定表达成纤维细胞生长因子_21真核细胞株新方法建立.pdf

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ISSN 1007 -7626 中国生物化学与分子生物学报 http :/ / cjbmb . bjmu . edu . cn 20 12 8 年 月 CN 11-3870 / Q Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology 28 (8):768 ~ 774 · · 技术与方法 快速筛选高水平稳定表达成纤维细胞生长因子-21 真核细胞株新方法的建立 * , , , , , , , 张雅坤 王文飞 何 昆 叶贤龙 刘 淼 韩苗苗 刘铭瑶 李德山 ( , 150030 ) 东北农业大学生命科学学院生物制药教研室 哈尔滨 -21 (FGF-21) , 摘要 成纤维细胞生长因子 是成纤维细胞生长因子家族的一名新成员 其研究已成为世 , 2 . , , 界糖尿病研究的新热点 并有望成为治疗 型糖尿病的新型药物 然而 应用真核表达系统 更加快 、 FGF-21 , , 速 高效生产更接近天然状态的 蛋白并对其生物学功能进行的研究 至今尚未报道 因此建立 FGF-21 . FGF-21 , 高效稳定的 真核表达系统至关重要 本研究以 为目的基因 利用谷氨酰胺合成酶基因 (GS) (EGFP ) , Pee12. 4 -FGF-21- 和绿色荧光蛋白基因 作为筛选标记 分别构建了单基因表达载体 Pee6. 4 -EGFP (Peedual)、Pee12. 4 -FGF-21-IRES-EGFP (PeeIRES)和双基因的真核表达载体 Pee12. 4 - FGF-21-IRES-EGFP-Pee6. 4 -FGF-21 (Peedual-IRES), CHO-K1SV , GS 分别转染 细胞后 通过 加压和流 ( 488 nm EGFP ) 式细胞术 在 波长的激发光下能检测到

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