土豆环氧化物水解酶基因的克隆、表达及其活性包涵体分析.pdfVIP

食品。- i 药品 Food and Dr ug 2012年第14卷第07期 237 土豆环氧化物水解酶基因的克隆、表达及其活性包涵体分析 李小灵，贺婉红，范立强+，程安阳，王刚，潘忠孝，朱庆庆，孟军 ( 华东理：r 大学生物反应器工程 国家重点实验事， 卜海200237) 摘要： 目的克隆、表达土豆环氧化物水解酶基因，分析其活性包涵体。方法提取土疆。蓉, RNA，以反转录获得的cDNA 为模板进行聚合酶链式反应( PCR) ，扩增得到土豆环氧化物水解酶基因，构建大肠杆菌表达质粒pET- REH，将重组表达 质粒pET—REH转化E．co i BL2 1( DE3) 。结果SDS．PAGE分析表明，I PTG诱导表达的重组土豆环氧化物水解酶在各种温度 下均丰要以包涵体形式表达，只在15 。C有微量可溶表达。酶活性分析表明，28℃表达的熏组酶包涵体酶活性性为0 ．7 U ／ mg 。结论初步证实了存在活性包涵体的观点。 关键词：土豆环氧化物水解酶，表达载体 ，重组表达，大肠杆菌，活性包涵体 中图分类号：Q55 文献标识码：A 文章编号：1672 ．979X( 2012) 07．0237．04 C oni ng and Expr es s i on of Epoxi de Hydr o a s e f r om So anumt uber os um and I t s Act i ve I nc us i on Bodi es As s ay LI Xi ao- i ng，HE Wan- hong ，FAN Li —qi ang，CHENGAn—yang，WANG Gang ，PAN Zhong—xi ao， ZHUQi ng—qi ng，MENG Jun ( St at e Key Labor at or y of Bi or eact or Engi neer i ng ，East Chi na Uni ver si t y of Sci ence and Techno og) , ，Shanghai 200237 ，Chi na) Abst r act ：Obj ect i ve To c one and t he of So anum t uber os um and expr es s gene encodi ng epoxi de hydr o a s e ana yze i t s act i ve i nc usi on bodi es ．Met hods The t ot a RNAwa s ext r act ed．The of So anum gene encodi ng epoxi de hydr o as e t uber osum was amp i f i ed by PCR wi t h cDNAas a t emp at e and i gat ed i nt o pET- 28a( +) r esu t i ng i n pET- P．EH． Recombi nant epoxi de hydr o as e was obt ai ned af t er expr es s i ng pET- REH i n Es cher i chi a co i BL2 I ( DE3) ．Resu t s SDS—PAGE ana ys i s showed t hat under di f f er ent t est t emper at ur e ．r ecombi nant p